实验二中和试验.pptxVIP

实验三 血清中和试验（固定病毒—稀释血清法）一、实验目的 了解中和试验的基本原理和几种不同的测定方法，掌握固定病毒—稀释血清法的操作步骤和计算方法及含义。二、原理 病毒感染敏感靶细胞后，引起细胞形态学变化，出现细胞病变效应（CPE）。特异性中和抗体与病毒结合后，可使病毒颗粒失去感染性，抑制细胞病变的出现。三、血清中和试验的分类1、终点法固定病毒—稀释血清法固定血清—稀释病毒法2、蚀斑减数法3、交叉保护试验四、用途1、疾病诊断2、病毒分离株的鉴定3、不同病毒株的抗原关系研究4、疫苗免疫原性的评价5、免疫血清的质量评价6、测定实验动物血清中是否存在抗体六、固定病毒—稀释血清法的操作步骤测定病毒液的TCID50(10-4.5/0.1ml )将测好TCID50的病毒液稀释成200个TCID50的病毒悬液。将血清作连续倍比稀释（具体方法是在8个EP管中各加入500μlD-Hanks，第一管再加500μl待检血清，混匀后，吸500μl至下一管，如此下去。一直到1:256，共8个稀释度），再将8个EP管内各加等量(500μl)病毒液，混匀。 同时设阳性血清对照，待检血清毒性对照，病毒对照和正常细胞对照，其中： 1 阳性血清对照：将阳性血清做8个2倍比稀释度，每孔各加50μl病毒液和50μl各稀释度血清。 2 待检血清毒性对照:将待检血清做8个2倍比稀释度，每孔各加50μlD-Hanks