低温医学原理.docxVIP

低温医学原理 ?低温医学与生殖医学专题? 细胞低温生物学研究进展 王沛涛1, 何立群2, 舒志全2, 赵　刚2, 李　强1 (1　青岛大学医学院附属医院低温医学科, 山东青岛　266003; 　2　中国科学技术大学热科学及能源工程系低温生物医学工程研究所) 众所周知, 离体的人体细胞、组织和器官在常规方式下不能长期保存。为保持这些离体生命材料的生物学功能, 必须采用长期保存措施。而在生物医学研究中, 比如细胞动力学、基因、干细胞治疗等, 也希望某一阶段细胞能长期保持, 以保证有充分的时间进行研究。本文简要讨论目前为止所发现的这些因素以及相应的低温损伤机制和预防措施。其中, 包括最著名的Peter Mazur 关于低温损伤的两点假定。 1　细胞的低温保存 目前, 低温保存是最常见的长期保存方法。细胞在低温下可以长期保存的机制在于低温下细胞的新陈代谢急速减慢。保存温度越低, 新陈代谢越慢, 保存时间也就越长。比如, 各个血液中心的血液常常在-5℃下保存, 保存时间一般为1个月; 如果在-196℃下保存, 应该能保存几个世纪。 由于低温冰箱内温度恒定(-86℃ ) , 而常压下液氮的沸点为-196℃, 所以这两个温度是经常采用的保存温度。 低温保存的主要优点是:①便于库存大量的细胞和组织, 便于对供者和受者的免疫性进行鉴定和配型; ②便于各医疗单位之间实施细胞及组织的长途调配; ③在移植之前, 能有足够的时间检测甚至消灭细胞及组织中的遗传疾病。 但实验发现, 低温保存过程本身也会杀伤细胞及损害组织, 这与低温保存的目的相矛盾。细胞及组织的这些损伤源于上面保存过程中的一个步骤或者它们的综合作用。低温生物学的一个极其重要的研究内容就是揭示与细胞及组织低温损伤相关的物理学和生物学规律, 尤其是那些与细胞内外水结冰相关的损伤。理解这些原理有助于建立生物物理2数学模型, 以描述低温保存过程中细胞对环境变化的反应, 从而为长期低温保存细胞和防止低温损伤研制最佳的降温程序及设备。本文回顾并讨论细胞低温损伤机制及其防范措施等基本低温生物学原理。 实际应用中, 细胞的低温保存主要包括如下步骤:①添加低温保护剂(CPA ) ; ②安全降温; ③在某一温度下长期保存; ④安全复温; ⑤取出低温保护剂。从常温到保存温度之间来回变化, 细胞内外的溶液就非常容易发生相变, 细胞外溶液的渗透压增大, 尤其是-15～-60℃[1], 对于细胞来讲是致命的, 因此低温生物学的首要任务就是确定细胞如何能安全地降温和复温。 [收稿日期]2021208217; 　[修订日期]2021212228 [基金项目]中国科学院“百人计划”、国家自然科学基金 、安徽省自然科学基金 , 以及中国科学技术大 学生命科学院生物基地资助项目 [作者简介]王沛涛(19652) , 男, 博士, 副教授。 2　常温下细胞的渗透损伤 向水中加入溶质会降低水的冰点, 一般来说, 溶质浓度越高, 冰点就越低, 因此成功进行低温保存的第一步就是添加恰当的低温保护剂, 而且高浓度溶质对细胞有渗透性损伤, 因此要适量。自50年以前, 英国一个研究小组偶然发现甘油是精子和红细胞的有效低温保护剂以来, 虽然不断出现新的CPA , 比如乙二醇、甲醇、丙二醇及二甲亚砜(DMSO ) , 有的也更加有效, 但甘油至今仍然是有效的CPA 之一。所有这些CPA 共有的最重要特征, 就是在大多数情况下, 能够稳定渗入细胞且在浓度为1mol/L 或稍稍偏上时对细胞相对无毒。 CPA 的保护功能体现在可以降低溶质(电解质) 浓度, 从而减缓低温下细胞的收缩[2], 而保护程度则首先取决于细胞内外CPA 对溶质的摩尔比, 即CPA 的保护作用一般具有依数性。某一CPA 对一个给定细胞是否有效, 取决于细胞对该CPA 的渗透性以及CPA 的毒性。此类CPA 必须依靠渗透来保护细胞, 但降温前的渗透和复温后的清除都会带来细胞体积的变化。这种变化如果超过其自身极限就可能造成伤害[3]。 添加低温保护剂后, 细胞脱水和渗透性低温保护剂渗入的传质过程可描述为[4]: =L P A R T [(M i n -M e n ) +σ (m s i -m e i i 2dt =V -V m s (1-σ) b (1+V +A P s (m e s -m s i 2) s m s i ) ) (　　公式中, V 为细胞体积,V b 为细胞内非溶液体积, V s 为溶质的偏摩尔体积, A