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基因工程简介问题：生物之所以体现出各种形态是基因表达的结果，各种生物间的性状千差万别这是为什么呢？ 例：1．青霉菌能产生对人类有用的抗生素——青霉素。2．豆科植物的根瘤菌能够固定空气中的氮气。3．人的胰岛B细胞能分泌胰岛素调节血糖的浓度。 小结：这些性状都是基因特异性表达的结果 问题 ：人类能不能改造基因呢？能不能使本身没有某个性状的生物具有某个特定性状呢？ 一、基因工程的概念 标准概念：在生物体外，通过对DNA分子进行人工“切割”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。通俗概念：按照人们的意愿，把一种生物的个别基因复制出来加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外 基因 DNA分子水平 剪切→拼接→导入→表达人类需要的基因产物问题：通过对基因工程概念的理解，我们知道其操作水平是在DNA分子水平，用普通的操作工具能够在如此微观的条件下操作吗？ 二、基因操作的工具 例：抗虫棉的培育是从苏云金芽孢杆菌中提取抗虫基因，并使其与运载体结合，放入棉细胞中的DNA结合起来，在棉细胞中发挥作用。问：在以上的基因工程中培育抗虫棉的过程中，关键步骤和难点是什么？关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取 关键步骤一的工具：基因的剪刀——限制性内切酶 关键步骤二：抗虫基因与运载体DNA连接 关键步骤二的工具：基因的针线——DNA连接酶。关键步骤三：抗虫基因进入棉细胞。 关键步骤三的工具：基因的运输工具——运载体。 ㈠　基因操作的工具1. 限制性内切酶（限制酶）　一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA 分子切断。２、基因的针线──DNA连接酶　连接酶的作用是：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。3、基因的运输工具——运载体　①能与目的基因结合；②能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；③比较容易得到；④具有多个限制酶切点；⑤具有某些标记基因基因工程基本步骤1.获取目的基因①鸟枪法 ②分子杂交法 ③逆转录法 ④人工合成法2.目的基因与运载体结合3.目的基因的导入4.目的基因的检测和表达㈠　基因操作的工具1.基因的剪刀──限制性内切酶（限制酶）　一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有200多种。重播　DNA被限制酶切断后有两个反向互补的“黏性末端”。被同一种限制切断的几个DNA具有相同的黏性末端，能够通过互补进行配对。（1）基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶） ①分布 ：主要在微生物中。 ②作用特点： 特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点。 ③结果： 产生黏性未端（碱基互补配对）。 ④举例：大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 思考题：要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性未端？２、基因的针线──DNA连接酶重播　连接酶的作用是：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。（2）基因的针线——DNA连接酶（图示）磷酸二酯键（梯子的扶手），不是氢键（梯子的踏板）。①连接的部位： 两个相同的黏性未端的连接。②结果： 思考题： 用DNA连接酶连接两个相同的黏性未端要连接几个磷酸二酯键？（3）基因的运输工具——运载体（图示）①作用： 将外源基因送入受体细胞。 ②具备的条件： 能在宿主细胞内复制并稳定地保存。具有多个限制酶切点。具有某些标记基因。 ③种类： 质粒、噬菌体和动植物病毒。 ④质粒的特点： 存在于许多细菌及酵母菌等生物中。质粒的存在对宿主细胞无影响。质粒的复制只能在宿主细胞内完成。细胞染色体外能自主主复制的小型环状DNA分子。 思考题： 1、质粒上会存在某些标记基因，这些标记基因有什么用途？3、基因的运输工具——运载体巩固练习：1、作为基因的运输工具——运载体，必须具备的条件之一及理由是（ ）A、具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达B、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的 目的基因C、具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件D、能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选2、DNA连接酶的功能是（ ）A、子链与母链间形成氢键 B、粘性末端之间形成氢键C、两DNA末端间的缝隙连接 D、A、B、C都对3、在基因工程中所先用的质粒，错误的是（ ）A、不能没有标记基因