2018仪器分析高效液相色谱法基本原理《仪器分析》课程教案-模块三项目一高效液相色谱法基本原理.docVIP

教学方案 《仪器分析》 教学方案 课程名称： 仪器分析 课程代码： 课程性质： 专业课程 课程学时： 60学时 课程学分： 4学分 黑龙江农业经济职业学院/食品加工技术专业 2017年07月制定 教学方案 模块三高效液相色谱法 项目一 高效液相色谱法基本原理 教学方案 授课班级 课时 2学时（90分钟） 授课时间 授课地点 多媒体教室 教学工具 投影仪 教学目标 专业能力：掌握高效液相色谱法的概念、特点、原理 社会能力：诚实守信、法律意识 方法能力：作决定和计划能力、时间管理的能力 教学方法 项目教学、理论讲授 教学过程 内容 教学环境 时间分配 下发任务单 教室给每位学生发放工作任务单，课程结束后上交。 教室 5分钟 组织教学 知识要点讲授 介绍本次课程的主要内容，本次课程重点与难点。讲授高效液相色谱法的概念、分类；及相关术语等。 教室 60分钟 任务单的填写 学生根据工作任务单要求，独立完成任务单的填写 教室 10分钟 上交任务单，共同完成任务单内容的讨论及答疑 上交任务单，由学生根据任务单的问题进行回答，教师指出问题讲解。针对本次课程的内容学生进行提问，教师答疑。 教室 15分钟 总计 90分钟 附件1 工作任务单 任务名称 姓名 填写时间 查阅材料 高效液相色谱法的概念 高效液相色谱法特点 高效液相色谱法与气象色谱法的区别 附件2 教学内容 项目一 高效液相色谱法的原理 一 简述 高效液相色谱法是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。 高效液相色谱法的应用范围很广，适于分析高沸点不易挥发的，但也有其局限性： （1）流动相多使用有机溶剂，成本高且易引起环境污染。 （2）缺少通用型检测器。（3）柱效不如气相色谱法。 （4）不能分离受热易分解、变性的具有生物活性的生化供试品。 二、高效液相色谱与其它色谱方法的比较 1. HPLC与经典LC的比较 经典LC HPLC 固定相颗粒100μm,不均匀 固定相颗粒10μm,均匀 常压下输送流动相 高压下输送流动相 柱效较低（H↑，n↓） 柱效较高（H↓，n↑） 分析周期长 分析周期短 经典LC HPLC HPLC与GC的比较 相同：均为高效、高速、高选择性的色谱方法，兼具分离和分析功能，均可以在线检测 分析对象及范围 流动相的选择 操作条件 GC 能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，占有机物的20% 流动相为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，对组分作用小 加温常压操作 HPLC 溶解后能制成溶液的样品，高沸点、高分子量、难气化、离子型的稳定或不稳定化合物，占有机物的80% 流动相为液体或各种液体的混合。它除了起运载作用外，还可通过溶剂来控制和改进分离。 室温、高压下进行 HPLC分类 按固定相的聚集状态分类：液-固色谱法 、液-液色谱法、 按分离机制分类：分配色谱法、吸附色谱法、离子交换色谱法 、空间排阻色谱法、 其它分离机制色谱法：亲合色谱法 AC、胶束色谱法 MC、手性色谱法 CC、毛细管电色谱法 CEC 当前最常见的HPLC：化学键合相色谱法 表一 不同类型分类机理及应用 类?型 主要分离机理 主要分析对象或应用领域 吸附色谱 吸附能，氢键 异构体分离、族分离，制备? 分配色谱 疏水分配作用 各种有机物分离、分析与制备 凝胶色谱 溶质分子大小 高分子分离，分子量及其分布的测定 离子交换色谱 库仑力 无机离子、有机离子分析 离子排斥色谱 Donnan膜平衡 有机酸、氨基酸、醇、醛分析 离子对色谱 疏水分配作用 离子性物质分析 手性色谱 立体效应 手性异构体分离，药物纯化 亲和色谱 生化特异亲和力 蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析 二、原理 液相色谱分离原理：液相色谱的分离系统也由两相—固定相和流动相组成。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱中。根据各组分在固定相及流动相中吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。 三、固定相 1.固体固定相 常用的固体吸附剂有活性炭、硅胶、氧化铝、分子筛等。其作用机理是吸附占主导地位。新型的固体固定相为高分子多孔微球。其作用机理是低温时，吸附占主导地位，高温时分配占主导地位。 化学键合固定相，分配占主导地位。主要用于分析永久性气体，如低级烷烃、氢、氧、一氧化碳、二氧化碳、氮氧化物、硫化氢等。 2.液体固定相 组