氨基柱的使用和保养.docxVIP

______________________________________________________________________________________________________________ 氨基柱的使用和保养 氨基柱是同时可以用于正相和反相条件的一种色谱柱。但正相溶剂和反相溶剂是不互溶的， 这一点不能忽略。对于新购柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。 如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶， 请先用异丙醇过渡。 过渡过程中注 意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高， 适当调低流速。 如果流动相中还有缓冲盐类， 先用 不含缓冲盐的同比例流动相过渡，避免缓冲盐的析出。 柱效检测： 我用于判断一个用户是否有经验的指标之一，是用户是否习惯配制一些柱效检测标准溶液。 说到柱效检测， 我可以向大家提供一个方法， 而且很通用， 你也可以用同样的标准溶液和流 动相来检测硅胶柱和氰基柱。 流动相： 10％乙酸乙酯＋ 90％正己烷 流速 1.0 标准溶液：乙苯（或甲苯）＋苯甲酸甲酯 检测波长 254nm 这个方法特别适用于新购柱子 （新购柱子往往保存在正相溶剂中） 时即进行检测， 如有问题， 可及时与供应商沟通。 也适合柱子在准备放置相当长一段时间之前， 进行充分清洗后进行检 测作为记录留档。 在平常的使用过程中， 如果分析物是固定重复的， 我们当然可以从对分析 物的分离分析情况来作出判断； 但如果分析物和分析条件不同时， 定期检测柱效可以避免柱 效下降导致分离不佳再分析查找原因这样浪费人力物力的过程。 特别要注意的是， 当氨基柱 （或氰基柱）在反相条件中使用时，如用该条件检测，请注意流动相的换相过渡问题。 氨基柱的使用： 精品资料 ______________________________________________________________________________________________________________ 氨基柱的键合官能团 氨丙基 要比 C18,C8 柱的键合官能团 C18,C8 容易水解， 所以首先要做 好其使用寿命稍逊的心理准备，特别是当你的使用条件是反相条件下时。 反相条件使用时， 要特别注意控制 PH 值范围， PH 值越低越有发生水解的危险， 流 动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。所以 ，在使用后以及准备长时间放置时， 必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是必需的。 当使用氨基柱进行酸性物质如果汁中糖份的分析时，酸性物质的存在意味着质子的 存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化， 使用一段时间后对于某类的分析物保留性 质有所改变或表现为柱效下降。这时， Kromasil 专家所给的 建议 是：用 5-10 倍的柱体积的 含 0.5-1.0 ％ NH3 的 50-50 乙腈 -水溶液冲洗该柱 （冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多 余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如 0.1 ％。 氨基柱的清洗 简单说起来， 正相条件下使用的氨基柱参照硅胶柱的清洗方法； 反相条件下使用的氨基柱参 照 C18 的清洗方法。 （1 ） 平时在正相条件下使用： 首先用 50 倍柱体积的异丙醇清洗，因异丙醇粘度较大需适当放低流速；之后，用 倍的甲醇清洗；之后，用异丙醇过渡回到平常使用的正相流动相，即可。（2 ）平时在反相条件下使用： 缓冲盐应及时冲洗，不能直接用纯甲醇冲洗缓冲盐等，属常识就不作特别交待。 50 倍纯甲醇冲洗；之后，用异丙醇过渡后，用二氯甲烷冲洗色谱柱；之后，再用异丙醇过渡回来到甲醇条件下。 这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。 精品资料 ______________________________________________________________________________________________________________ LUNA 氨基柱的使用方法 氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意的是：正相溶剂和反相溶剂是不 互溶的，正常情况新氨基柱保存在正相环境中，如 LUNA 氨基柱保存在正己烷 -乙腈（ 99 ： 1）中。 2. 正相使用 2.1 新柱子可直接用流动相。推荐先用正己烷 -乙腈（ 99 ： 1）以 0.5ml/min 的流速冲 10 倍柱体积，再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲 10 倍柱体积，最 后换成流动相。 2.2 正相使用时，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于还原糖的分析；流动相要彻底 脱气，并不得含有羰