细菌学检验课件.ppt

琼脂卫星试验（脑心琼脂） X 、 V 因子需求试验 →又称纸片法卫星试验 ① 不含血液琼脂平板上密集划线接种待测菌或 0.5 麦 氏单位菌悬液涂抹接种。 ②将 X 、 V 、 X+V 因子三种纸片贴在接种细菌的平板上 纸片间相距 5cm 以上，（因为 V 因子分子量小，扩散 距离远），否则会出现 X 因子假阳性结果。 ③培养后观察结果 ④ （ X+V ）因子结果阴性的几种可能原因 ● ● ● ● 待测菌死亡 培养基缺乏营养 孵育条件未满足 纸片失效 X 、 V 因子需求试验 第二节 人兽共患微生物 ： 布鲁菌属 既能感染动物又能感染人的微生物。 包括病毒、细菌、螺旋体、立克次体。 一、分类 羊布鲁菌、牛布鲁菌、猪布鲁菌、绵羊布鲁菌 狗布鲁菌和森林鼠 ( 木鼠 ) 布鲁菌。 我国流行的主要是牛、羊、猪三种布鲁菌，羊最常见 二、临床意义 ★致病因素： 侵袭力和内毒素 ★ 传染源： 病兽。常见的为牛、羊、猪。 ★ 易感人群： 对人有极强的致病力。 ★ 侵袭力： 强，可穿透完整的皮肤和粘膜 进入宿主体内，且有很强的繁 殖力和扩散能力。 ★ 传播途径： 皮肤直接接触、消化道。 ★ 是导致布鲁菌病的病原体。 主要症状： 长期发热 ( 波浪热 ) 、多汗、关节 痛及全身乏力和肌肉疼痛。 三、微生物学检验 （一）基本特性 1 、形态结构与染色： 革兰阴性短小球杆菌，两端钝圆，偶见两极浓染， 无鞭毛、 无芽胞，光滑型菌株有微荚膜。常单个存在，很少成双或成短链。 革兰染色常出现不规则结果，因为布鲁菌不能很好地被碱性复红 染色， 革兰染色着色弱，镜下呈“细沙状“。 常用下列染色法。 柯兹洛夫斯基染色法（柯氏染色）： 涂片固定后，用 0.5% 的沙黄微加热 2 分钟，水洗；再用 0.5%--1% 的孔雀绿染 1 分钟，水洗。待干后镜检。 本菌为鲜红色 ， 背景 （其它细菌或细胞）为 绿色 。对比非常好（为了有对比，常与大 肠埃希菌混合涂片）。 2 、抗原构造： 本菌属抗原结构复杂，目前临床用于诊断的主要有 A 抗原 和 M 抗原，两种抗原在各种布鲁菌种含量不同。 羊布鲁菌： 牛布鲁菌： 猪布鲁菌： A ： M 约 1 ： 20 A ： M 约 20 ： 1 A ： M 约 2 ： 1 3 、培养特性： 专性需氧菌，营养要求较高，初次培养需要 5% ～ 10% 的 CO2 环境最适温度35℃ - 37℃，最适 PH6.7 。本菌 生长缓慢 ， 4 ～ 5 天在血平板上长出较小无色、凸起的光滑或粗糙型菌落。 生长中需要 VB1 、烟酸和生物素，添加血液会增加检出，但 不需要 X 、 V 因子。 4 、抵抗力 自然界中抵抗力较强。 （二）实验检查 1 、标本采集 2 、标本直接检查 3 、分离培养与鉴定 1) 分离培养 （ 1 ）培养基： 血平板、马铃薯培养基、双相培养基、肝浸肉汤。 （ 2 ）液体培养基： 培养 24-48 小时，出现轻度混浊无菌膜； 7 天后有菌膜形成 并形成粘性沉淀，不易摇散。 （ 3 ）血平板： 5-7 天可形成细小、灰色不溶血菌落。 （ 4 ）选择培养基： 无色、半透明、圆形、表面光滑、边缘整齐 中央稍凸起的菌落。有时出现黏液样或干燥 的 硬皮样菌落 。 （ 5 ）阴性报告： 30 天后无生长者。 2 ）鉴定： 依据细菌形态学、生化反应、染料抑制试验、 血清凝集试验。 ? ? ? 细菌形态学（柯氏染色） ～初步报告 生化反应：触酶 + 、氧化酶 +/- 等。 染料抑制试验（或生长试验） 常用硫堇和复红，有商品供应的染料片剂 方法类似于 K-B 法药敏试验，药片周围出现抑菌 圈为敏感（抑制），无抑制即生长（耐受）。 也可将不同浓度、不同种类的染料加入培养 基中，再接种细菌培养后观察。 4 、抗体检测 感染后两周可出现抗体，且随 着病程的进展抗体效价不断升高。 所以可利用多种免疫方法进行抗体 的测定。 第三节 巴斯德菌属 一、分类 巴斯德菌属共有 10 多种与人类疾病有关， 但临床上最常见的多为多杀巴斯德菌。 二、临床意义 本菌属细菌广泛寄生于野生动物和家畜 （猫、狗）的齿龈和鼻咽部，是引起动物感染 的病原菌。人类感染多是通过被动物咬伤或抓 伤而感染。可引起多系统感染及伤口感染。近 年来，家养宠物增多，所以该病较为常见。 三、微生物学检验 1 、形态结构与染色： 革兰阴性小杆菌或球杆菌，常见两极浓染。 无芽胞、 无鞭毛 、有荚膜，多单个存在，有时成对或短链。 2 、培养特性： 需氧 或兼性厌氧，最适温度35℃，在含血培养基上生长良好； 液体培养基呈混浊生长。 肠道选择培养基上多不生长 3 、抗原构造： 有两种抗原成分（菌体抗原和荚膜抗原），与本菌 的毒力有关，也可用于分型。 4 、生化反应：