选修三基因工程基本操作程序讲课用.pptVIP

1.2 基因工程的基本操作程序;基因工程的操作步骤 1获取目的基因 2 目的基因与运载体结合 3 目的基因导入受体细胞 4 目的基因的表达和检测; 基因工程的基本操作程序;一、目的基因的获取;;一、目的基因的获取;一、目的基因的获取;PCR;3.基因文库的构建方法;（2）cDNA文库的构建：;基因组DNA文库;基因文库中不是直接保管相应基因，而是保存受体菌，而菌中含基因; 2、原理：DNA半保留复制 3、原料：模板DNA；DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；离子 ;变性;具体过程;① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ;⑥过程：;PCR技术扩增与DNA复制的比较;;2、基因表达载体的组成：;启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来;①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼