Tris-HCl及其他几种缓冲液配方知识讲解.pdf

Tris 是什么？有什么作用？ Tris-HCl ，Tris-EDTA 如何配制？ Tris ：三羟甲基氨基甲烷 三羟甲基氨基甲烷（ Tris(hydroxymethyl)aminomethane ，一般简称为 Tris ）是一种有机化 合物，其分子式为 (HOCH2)3CNH2 。Tris 被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓 冲液的制备。例如，在生物化学实验中常用的 TAE 和 TBE 缓冲液（用于核酸的溶解）都需 要用到 Tris 。由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应 Tris 为弱碱，在室温（ 25 ℃下，它的 pKa 为 8.1 ；根据缓冲理论， Tris 缓冲液的有效缓 冲范围在 pH7.0 到 9.2 之间。 Tris 碱的水溶液 pH 在 10.5 左右，一般加入盐酸以调节 pH 值至所需值，即可获得该 pH 值 的缓冲液。但同时应注意温度对于 Tris 的 pKa 的影响。 由于 Tris 缓冲液为弱碱性溶液， DNA 在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解 性。人们常常在 Tris 盐酸缓冲液中加入 EDTA 制成 “TE缓冲液 ”，TE 缓冲液被用于 DNA 的 稳 定 和 储 存 。 如 果 将 调 节 pH 值 的 酸 溶 液 换 成 乙 酸 ， 则 获 得 “TAE 缓 冲 液 ” （Tris/Acetate/EDTA ），而换成硼酸则获得 “TBE缓冲液 ”（Tris/Borate/EDTA ）。这两种缓冲 液通常用于核酸电泳实验中。 用途：有机合成中间体。 在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系， 稳定电泳过程中的 PH 值。 在凝胶中也起到稳定 PH 的作用，只不过是 Tris-HCl 缓冲体系。 Tris 缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂， 还有许多重要用途。 Tris 被用于不同 pH 条件下的蛋白质晶体生长。 Tris 缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（ C. elegans 核纤 层蛋白 lamin ）的中间纤维的形成。 Tris 也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。 此外， Tris 还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。 Tris 也被用作滴定标准物。 1 M Tris-HCl (pH7.4 ，7.6 ，8.0) 组份浓度 1 M Tris-HCl 配制量 1L 配制方法： 1.称量 121.1 g Tris 置于 l L 烧杯中。 2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表加入浓 HCl 量调节所需要的 pH 值。 pH 值 浓 HCl 7.4 约 70 ml 7.6 约 60 ml 8.0 约 42ml 4. 将溶液定容至 1 L 。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大， 温度每升高 1 ℃，溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位。 1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 组份浓度 1.5 MTris-HCl 配制量 1 L 配制方法 1.称量 181.7 g Tris 置于 1 L 烧杯中。 2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓 HCl 调节 pH 值至 8.8 。 4. 将溶液定容至 1 L 。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大， 温度每升高 1 ℃，溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位。 TE