细胞工程2基本技术.pptxVIP

细胞工程;第二章 实验室及实验基本技术; 　一. 实 验 室 设 置;1、实验室组成;基 本 实 验 室;辅 助 实 验 室;2、基本设备配置;常规设备;大容量高压灭菌器 ;Zeiss滤器;超净工作台;培养设备;细胞学研究设备;3、培养容器与用具;;二. 基本技术;1、洗 涤;? 常用的铬酸洗涤液配方 ; 玻璃器皿洗涤 新购置的需稀酸浸泡过夜，洗衣粉刷洗，清水冲洗；用过的洗衣粉刷洗，清水冲洗后备用 塑料用品洗涤 新购置的即用；用过的冲洗干净后稀碱浸泡过夜，清水冲洗，稀酸浸泡30min，清水冲洗后备用。 金属??品洗涤 金属用品一般不宜用洗涤液洗涤， 需要清洗时一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。 ;培养基　 湿热灭菌，即高压蒸汽灭菌或过滤灭菌。 玻璃器皿 湿热灭菌或干热灭菌，即在烘箱中加热至160℃～180℃ 40min，或120℃2h。 金属用具 干热灭菌或浸泡于70﹪酒精后火焰灼烧。 操作环境 接种室常采用定期熏蒸，熏蒸剂常采用甲醛加高锰酸钾，一般每100ml甲醛加5g高锰酸钾。 ;? 培养基体积与灭菌时间的关系;3、培养基组成及配制; ;复合配方培养基基本成分; 水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺少的物质。配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。;无 机 盐 类;有 机 成 分;a- 1，2-苷键或b-2，1 -苷键;生物素即维生素H，它是多种羧化酶的辅酶。在生物合成中起传递和固定CO2的作用。 ;肌醇又称环己六醇，广泛分布在动物和植物体内。最早从心肌和肝脏中分离得到。环己六醇在自然界存在有多个顺反异构体，但有价值的、天然存在的异构体为顺-1 ，2 ，3 ，5-反-4，6-环己六醇即肌肉肌醇，结构式如右，是磷脂的一种－磷脂酰肌醇的组成成分。在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的促进作用。;腺嘌呤的作用首先是skoog和Tsui于1948年发现的，他们在实验室中观察到，使用腺嘌呤能够刺激烟草茎段不定芽的发生。以后的研究表明，腺嘌呤是合成各种细胞分裂素的前体物质之一。外源添加酰嘌呤具有促进细胞自身合成细胞分裂素的功能，有利于细胞的分裂和分化，促进芽的形成和生长。 ;;天然复合物：大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用。由于成分复杂，实验可重复性差，应尽量不用或少用。但有时大胆启用此类物质可能起到意想不到的效果。常用的有： CH（水解酪蛋白）、CM（椰子汁）、 ME（麦芽浸提物）、YE（酵母浸提物）、 TJ（番茄汁）、香蕉、马铃薯等。;植 物 激 素; 植物激素，是植物新陈代谢中产生的天然化合物，能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠以及萌发等许多的生理生化活动，在培养基的各成分中，植物生长调节物是关键物质，对植物组织培养起着决定性作用，它的运用也是植物细胞工程研究的重要的基本方法。;生长素类(auxin) 吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D) 细胞分裂素类(ctytokinin) 激动素(KT)、6-苄基嘌呤(6-BA)、异戊烯腺嘌呤 (2-ip)、玉米素(ZT) 赤霉素类( gibberellins) GA3 脱落酸(abscisic) 乙烯(ethylene） ;Auxin 体内可增强RNA和蛋白质的合成，促进细胞伸长和分裂，使保持顶端优势，刺激生根等； 体外促进离体细胞分裂形成愈伤组织，或者是诱导试管苗生根； IAA见光易分解， IBA、NAA和2,4-D稳定，是组培中常用的生长素； 不同的生长素生理活性的强度不同，IAA、NAA和2,4-D的强度比约为1：10：100;赤霉素 存在于从真菌到高等植物中的化合物，共20余种，其中GA3为组培中常用； 体内主要功能为促进细胞的伸展和茎叶的伸长等； 组培中主要用于诱导离体芽的萌动和伸长;IAA→由顶端分泌，诱导细胞分裂，促进生根 ①常用种类：IAA、IBA、NAA、2,4-D等 使用效价：IAAIBANAA2,4-D NAA、IBA →生根培养 2