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动物细胞工程 12 月 20 日 动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆 抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 一、动物细胞培养 1、定义：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，在适宜的培养基 中，让这些细胞生长和增殖。 2、原理：细胞增殖 3、过程 分散成单个细胞， 制成细胞悬液 注意： ① 10 代以内细胞保持正常的二倍体核型，无突变发生，常用于实践或冷冻保存。 ②超过 50 代，极少数细胞突破自然寿命极限，突变成癌细胞，具有无限增殖能力；若超过 50 代，细胞不再增殖，全部死亡，则说明细胞没有发生癌变。 ③分瓶之前，称原代培养；出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培养为传代培养。 思考回答： ⑴、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养 ? 答：其细胞的分化程度低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。 ⑵、动物细胞培养需要脱分化吗 ?为什么? 答：不需要。因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以 没有类似植物组织培养的脱分化过程，要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导 动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。 ⑶、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞， 说明细胞间的物质主要是什么成分 ?用胃 蛋白酶行吗 ? 答： 主要是蛋白质，不行，因为胃蛋白酶作用的适宜 PH 约为 2，当ＰＨ大 于 6 时就会失去活性， 多数动物细胞培养适宜 PH 为 7.2－7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性。 （胰蛋白酶作用的适宜 PH 为 7.2－8.4，胰蛋白酶活性较高） ⑷、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗 ?为什么? 1 答：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质，长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损 伤，因此必须控制好消化时间。 ⑸、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 4、重要概念 ①细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 产生原因：培养贴附性细胞时，细胞要能够贴附于底物上才能生长增殖。 培养要求：培养瓶或培养皿内表面光滑、无毒，易于贴附。 ②细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种 现象称为细胞的接触抑制。 ③原代培养：动物组织消化后的初次培养 ④传代培养：原代培养的细胞由于接触抑制不再分裂，需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分 瓶继续培养，让细胞继续增殖，这种培养叫传代培养。 5、培养条件： ⑴无菌无毒环境：无菌 —— 对培养液和所有培养用具进行无菌处理；在细胞培养液中添加一 定量的抗生素。；无毒 —— 定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对自身造成危害。 ⑵营养： 成分：所需营养物质与体内基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量 元素等，还需加入血清、血浆等天然成分。 培养基类型：合成培养基（将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养 基） ⑶温度和 pH值：哺乳动物多以 36.5±0.5℃为宜，多数细胞生存的适宜 pH为7.2～7.4。 ⑷气体环境：通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含 95 ％空气加 5 ％CO2 的混合气体的培 养箱中进行培养。 O2 2 ：是细胞代谢所必需的 CO 主要作用是维持培养液的 pH。 6、应用：生产有重要价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。基因工程中受 体细胞的培养。用于检测有毒物质