结核病实验室质量保证及快速诊断进展Bacteria.pptxVIP

结核病实验室质量保证及快速诊断进展;内容;结核病实验室工作在结核病控制中的作用;Diagnosis of Pulmonary TB Relatedto Numbers of Tubercle Bacilli;细菌 – 让人们联想到什么?;为什么要进行EQA;痰涂片镜检EQA 培训的意义;结核病实验室相关的流行病学理论;1. 细胞 2. 通过从环境中摄取化合物和能量维持其结构 3. 对外部刺激的反应性 4. 复制、繁衍并传递给其子代遗传信息 5. 进化适应环境;结核分枝杆菌在人体中的生活周期;结核分枝杆菌的生活周期;微生物和人类;;如何推测特定病原体可以致病?;Spectrum of virulence;水库理论;痰涂片镜检的操作原理;分枝杆菌的发现历史;Robert Koch – 第一个证明细菌可以致病;Koch确定了3个重要疾病的病因 ;结核病;分辨率和对比度;光学显微镜的基本原理;电子显微镜下的结核分枝杆菌;生理条件下细菌的表面往往带有大量负电荷;染色反应;分枝杆菌涂片镜检基本原理;结核菌感染及排出示意图;结核病;结核病;细胞壁;细胞膜;; Cell Membrane;1. 痰涂片操作程序原理 2. 二甲苯问题; 假阴性 假阳性 技术错误 涂片: 太薄/太厚、暴露在紫外线下 标本中的混杂物质 / 加热时间过长 / 使用污染的木签 染色: 染色质量不佳、未热染、染色时 结晶/环境抗酸菌、 间太短、脱落、涂片未固定 交叉污染 脱色: 脱色不佳 脱色不佳 复染: 过染 染色不佳 镜检员 视力缺陷、仅观察少数视野、 经镜油交叉污染 读片错误： 未经培训 未经培训 记录/报告： 记录错误 记录错误;;;OUTLINE;结核分枝杆菌的细菌学诊断;显微镜检查;培养;菌种鉴定;非培养的诊断方法;什么是分子生物学诊断方法 ? 为什么用分子生物学诊断方法 ? 可得的分子生物学方法? ;分子生物学方法是传统方法的必要补充;分子生物学方法 – 如何发挥作用?;分子生物???方法是一系列DNA初级结构的方法;PCR 实验室; ①Bactec放射呼吸测定 以含有放射标记的软脂酸为底物的液体培养基，自动测量分枝杆菌代谢14C软脂酸脱致过程中释放的14CO2的量。该法药敏报告可缩短为4一12天。 ②分枝杆菌生长指示管法 Bactec放射呼吸测定法的替代方法。以培养基中加入荧光钌复合物代替放射性标记，其荧光衰减与细菌代谢过程中O2的消耗量有关。荧光衰减可通过一系列不同的紫外透照管检测。;流式细胞仪测定法;比色法;噬菌体生物扩增法 将分枝杆菌噬菌体感染结核分枝杆菌，未进入菌体内的噬菌体用特异的杭噬菌体物质灭活，进入菌体内的噬菌体得到保护而复制增殖，溶菌后释放子代噬菌体，将此噬菌体与快速生长的耻垢分枝杆菌混合，接种在固体培养基上培养，观察蚀斑的产生。蚀斑的数量与噬菌体数量有关，也与在含抗结核药物培养基上存活的结核分枝杆菌数有关。;噬菌体荧光素酶检测法 Jacobs等将荧火虫荧光素酶基因导入分枝杆菌噬菌体，这种噬菌体感染分枝杆菌后，荧光素酶基因被代谢活跃的分枝杆菌活化，在菌细胞内ATP存在的条件下，可产生光子，通过荧光检测器测定发光信号。只有耐药的分枝杆菌才能在含药的培养墓上生长，产生光子，敏感菌和死亡菌不产生或产生后不能维持。 ; 噬菌体生物扩增法原理示意图;Gen Probe 方法检测结核分枝杆菌;RNA/RNA错配法 Nash等(1997)首先将该法用于RFP耐药菌株培养物的检测。该法是基于双链RNA能抵杭RNA酶的消化的原理而建立的。将待检菌株以及药物敏感的参考菌株(H37Rv)的PC