生物化学：第十六章 RNA的生物合成.pptx

八年制《生物化学与分子生物学》第3版 多媒体课件与在线课堂;第一节;3; RNA合成有两种方式：;（一）依赖DNA的RNA合成是转录;参与转录的物质;7;8;（二）依赖RNA的RNA合成是复制 ;10; 两股DNA 链中，只有其中一股链能作为模板转录出RNA，称之为模板链（template strand）。与模板链互补的另一条链，其编码区的碱基序列与该基因转录产物mRNA 的序列基本相同（仅T代替U），称为有意义链（sense strand）或编码链（coding strand） ;转录单位;原核生物的多顺反子;;（一）RNA聚合酶不需要引物而直接启动RNA链合成 ;DNA依赖的RNA聚合酶催化RNA合成的机制 ;17;大肠杆菌RNA聚合酶由多个亚基组成;核心酶 (core enzyme);20;真核生物的RNA聚合酶;原核生物的转录过程 The Process of Transcription in Prokaryote;原核生物的转录过程可分为转录起始、转录延长和转录终止三个阶段 ;RNA聚合酶必须准确地结合在转录模板的起始区域 DNA双链解开，使其中的一条链作为转录的模板;（一）原核生物启动子是RNA聚合酶识别与结合的位点;RNA聚合酶保护法阐明了启动子的结构，即转录起始位点 ;;（二）RNA pol全酶介导转录起始;原核生物RNA聚合酶全酶起始转录; 在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形成第一个磷酸二酯键;; E. coli 的转录起始和延长 ;二、RNA pol 核心酶延长RNA链;1. ?亚基脱落，RNA–pol聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着DNA模板前移;35;转录延长有以下特点 ;转录过程中DNA的超螺旋结构变化;三、原核生物的转录与翻译同时进行 ;起始位点 ;依赖?因子的转录终止 非依赖?因子的转录终止;?因子是由相同亚基组成的六聚体蛋白质，亚基分子量46kDa ρ因子识别产物RNA 3′- 端富含C碱基的序列，并与之结合 ρ因子结合RNA后和RNA pol都可发生构象变化，从而使RNA pol的移动停顿 ?因子还有ATP酶活性和解螺旋酶(helicase)的活性 ;（二）非依赖ρ因子的转录终止;RNA ;E. Coli 色氨酸操纵子mRNA转录物3?端的转录终止结构;茎环结构使转录终止的机制;第三节; 真核生物的转录过程比原核复杂。二者的转录起始过程有较大区别，转录终止也不相同 真核生物转录开始.flv ;一、真核生物基因转录需要调整染色质结构并需要转录???子协助;真核生物转录起始需要在转录因子协助下RNA pol对起始点上游DNA序列进行辨认和结合，生成转录前起始复合体（preinitiation complex, PIC） 为转录起始前复合体装配所必需的转录因子称为通用转录因子（general transcription factors，GTF）或基本转录因子（basal transcription factors ） 转录模板与酶的结合.flv ;真核生物中不同的RNA pol需要不同的基本转录因子（TF）配合完成转录的起始和延长。相对应于RNA pol I、 RNA pol II、RNA pol III，这些TF分别称为TFI、TFII、TFIII ，通用转录因子和RNA聚合酶组成转录任何启动子所需的基础转录装置 ; 真核细胞RNA 聚合酶Ⅱ负责蛋白质编码基因的转录，RNA 聚合酶Ⅱ启动转录所需要的通用转录因子包括TFⅡA、TFⅡB、TFⅡD、TFⅡE、TFⅡF、TFⅡH，在真核生物进化中高度保守;参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ的作用;关键是识别启动子中的TATAAA(TATA盒)共有序列 TFⅡD是由TBP和TAFs组成的复合物，是识别TATA盒的关键转录因子 转录起始点上游都有特异DNA序列，包括启动子、增强子等，统称为顺式作用元件(cis-acting element) ;;真核RNA聚合酶Ⅱ与通用转录因子的作用过程 ;TFIIE、 TFIIH具有解旋酶（helicase）活性 TFIIH具有激酶活性，它的一个亚基能使RNA pol II的CTD磷酸化，周期蛋白依赖性激酶9（CDK9)也有此作用 RNA聚合酶羧基末端的共有重复序列，称为羧基末端结构域(carboxyl-terminal domain, CTD) CTD磷酸化能使开放复合体的构象发生改变，启动转录。 ;57;（四）转录延长过程需要移动核小体;;（五）真核生物蛋白质编码基因转录没有固定的终止位点;5?------AAUAAA-;几种主要的加工方式;（一）前体mRNA在5′-端加上“帽”结构;1. 内含子在剪接接口处剪除;3. 剪接体是内含子剪接场所;4. 前体mRNA