多聚酶链式反应扩增DNA片段[1].ppt

多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] ③延伸 DNA模板－引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则与半保留复制的原理，合成一条新的DNA链 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 靶序列 靶序列 引物Ⅰ 引物Ⅱ 5’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ Taq DNA 聚合酶 PCR 循环第三步 ：引物延伸 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 靶序列 靶序列 第1个 PCR 循环完成后 ：得到两个拷贝的靶序列 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 循环次数 DNA数量 1 2 2 4 3 8 20 1,048,576 30 1,073,741,824 3、30次循环后靶序列扩增的数量 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 4、PCR 循环的结果 ② DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增 ①从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 多聚酶链式反应扩增DNA片断 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 一个核苷酸上的磷酸基团上的“－OH”和另一个核苷酸分子的第三位碳原子上的羟基之间失去一分子水，形成磷酸二脂键，即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二脂键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’、5’、磷酸二脂键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“－OH”末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端 4、多脱氧核苷酸链得形成 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 脱氧核苷酸结构式 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] O O P O HO 碱基 O OH O O P O HO OH 碱基 5’ 3’ 3’ 5’ 碱基 脱氧核糖 磷酸基团 碱基 脱氧核糖 碱基 脱氧核糖 5’ 3’ 多脱氧核苷酸链结构简图 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 元贝驾考 元贝驾考2016科目一 科目四金手指考试 金手指驾驶员考试 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 5、DNA分子的双螺旋结构 ① DNA分子是由两条反向平行的（即一条链为3’－5’，另一条链为5’ －3’ ）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则双螺旋结构 ②脱氧核糖与磷酸交替连结，排列在外侧，构成基本骨架；碱基排列在链的内侧 ③两条链上的碱基通过氢键连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与胸腺嘧啶配对，鸟嘌呤一定同胞嘧啶配对 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 6、利用碱基互补配对规律的计算 规律一：DNA双链中的两条互补链的碱基相等，任意两个互补的碱基之和相等即A=T，G=C。任意两个不互补的碱基之和恒等，占碱基总数的50%。即：A+G＝T+C＝A+C＝T+G＝50%，（A+G）/(T+C)＝(A+C)/(G+T)＝(T+C)/(A+G)＝1 规律二：在DNA双链中的一条单链(A+G)/(T+C)的值与另一条互补链的 (A+G) /(T+C)的值互为倒数关系 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 规律三：DNA双链中，一条单链的(A+T)/(G+C)的值与另一条互补链的(A+T)/(G+C)的值是相等的，也与整个DNA分子中的(A+T)/(G+C)的值相等 （二）DNA分子的特性 1、稳定性 在DNA分子双螺旋结构的内侧，通过氢键形成的碱基对，使两条脱氧核苷酸长链稳固的并联起来 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 例题：甲DNA分子中，A和T占25％，G和C占75%，乙DNA分子中，G和C占25％， A和T 占75%，哪一个稳定？ 答：甲DNA分子比乙DNA分子稳定。因为A与T之间形成两个氢键，在G和C之间形成三个氢键，三个氢键比两个氢键稳定，所以在DNA分子中含有较多的G－C碱基对比含有较多的A－T碱基稳定 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] 2、多样性 构成DNA分子的碱基对的数量不同，碱基对的排列顺序千变万化 例题：如果有4000个碱基对，碱基对有多少种排列方式？ 答：碱基对排列方式有44000种 3、特异性 不同的DNA分子由于碱基对的排列顺序存在差异，因此每一个DNA分子的碱基对都有其特定的排列顺序，这种特定的排列顺序包含着特定的遗传信息，每一种生物(A+T)/(G+C)的比值是特定的 多聚酶链式反应扩增DNA片段[1] （三）DNA的复制 2、时期 有丝分裂间期减数第一次分裂前的间期 3、场所 细胞核（主）、线粒体、叶绿体 4、模板 DNA母链 1、概念 由一个DNA形成两个完全相同的