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样本采集 样本采集要注意的重点就是 ,所采集的临床标本一定要正确与采集的时间合适 ,并注意采用正确的标本容器 ,采集的方法程序对有些临床标本非常重要。在疾病发展过程中 ,标本采集过早或过晚都可能会给出假阴性结果。 尽可能在最短的时间内完成样本的采集 (应该保证 30min 内完成 ,不适当的处理时间将直 接影响与干扰研究的结果 ),应尽快降低所采集组织样本的温度。 肿瘤组织标本的采集与处理应遵循严格的生物安全处理规范 ,也可根据研究者所提出的特殊要求 ,按照对方提供的操作模式进行相关处理。 (1)患者入院后进行生物安全性检查。 检测 HIV 以及嗜肝病毒 HBV 及 HCV 感染情况。 HIV 感染患者不列为采集对象。 HBV 及 HCV 感染者 ,须在样本上明确注明。(3)组织标本取材时间 肿瘤外科手术后 ,标本离体 30min 内。(4)标本采集 每种肿瘤主要采集 3 类生物样本 ,并要保证这些样本的质量与数量能够用于 DNA、 RNA 与蛋白质提取及满足相关的实验分析。 新鲜组织 (包括手术与活检组织 ) 实体组织样本采集包括外科手术切除的或活检与尸检得到的正常、 良性与恶性肿瘤组织。手术结束后 ,在临床肿瘤病理专家的指导下 ,在不影响病理诊断取材需要的前 提下 ,采集组织样本。 A。标本取材部位 :肿瘤组织、 癌旁组织 (癌组织旁 1cm)与正常组织 (癌组织旁 5cm 以外或最远处 )。 临床诊断明确 ,未经放疗与化疗的手术切除标本 ,在病理医生指导下取材。 尽量保证癌组织没有坏死 (有坏死的标本很难提取高质量的 RNA 与蛋白 )。 配对“癌旁组织” ,选择距离癌灶边缘 3 cm 范围内的组织样本 ,配对“正常组织” , 要选择距癌灶边缘 5 CM 以上或距离癌灶边缘最远段 (或手术切缘处 )取组织样本 ,应注明距离。对于空腔器官 ,如食管、胃、肠、胆囊、膀胱等 ,“癌旁组织” “正常组织”应取 相应部位的“粘膜组织”样本。 在保障病理学检测所需标本的前提下 ,尽量提供足量的肿瘤与癌旁正常组织 ,一般不少于 200mg 或 10E7细胞。 手术切除的组织样本必须迅速置于液氮中 ,然后保存于液氮罐或 -80℃冰箱 ,这一过程尽量在手术标本离体后 30 分钟内完成。 其中一块组织可用 OCT 处理后冻存 ,可用于形态学观察与显微切割。(OCT(Optimal Cutting Temperature) 包埋剂就是一种常用的固形剂。用其包埋组织进行速冻后 ,能与组织固定成形 ,有利于保存组织结构完整性 ,便于其形态结构的分析 ) B。过程 :使用数码相机拍摄标本外观后 ,将标本切成小块 (直径 0、5cm× 0、5cm, 厚度 0、5cm),为减少处理时间 ,标本不应切得太小 ,然后放入冻存管中 ,标记后放入标本盒中 ,盒盖上附有记录标本编号、采集时间及标本类型的标签。每例病人样本保存 3-5 份冻存管标本。每份组织重量原则上不低于 2g。 石蜡包埋组织 中性福尔马林固定手术切除标本按病理学操作规范进行取材 取材部位包括癌灶 ,以及癌灶周围 3cm 以内的癌旁组织 ,3~5cm 的近癌组织 与 5cm 以外的远癌组织或距癌灶边缘最远段分别取 2-3 块。取材尽量以癌灶为中心水平向两侧 取材 ,尽量保证足够大的组织样本。取材应该以“远癌 -近癌 -癌灶”的顺序。癌灶处取材包括癌与正常组织的交界及肿瘤浸润最深处。所有取材的组织块应标明取材部位。 采集完整的临床病理与随访资料 ,其中治疗过程与生存期的资料最为关键。3)血液 (包括血浆、血清 ) 始终遵循标准防护方法 ,所有操作均要戴手套。在抽取静脉血时 ,应当使用一次性的安全 真空采血管取代传统的针头与注射器 ,因为这样可以使血液直接采集到带塞的运输管与 (或 )培养管中。用完后自动废弃针头。每例不低于全血 10mL,分装两份。以全血作为待测标本时 ,必须注意抗凝剂的选择 ,一般使用 EDTA-K3 或枸橼酸钠 ,不可使用肝素。全血样本如用于 DNA 提取检测 ,可 4℃下短期保存 ,如用于 RNA 检测 ,则应在取血后尽快提取 RNA。 及时采集入组病例的外周血标本 ,初诊患者 3-5 ml,EDTA 抗凝 ,3000rpm 离心 ,血浆与有形成份 (白细胞成分 )分别用统一质量标准的容器保存 (尽量在 2h 内完成血浆的分离工作 )。 特殊病例要保存治疗前后的外周血标本各 5 ml (血浆或血清 )。 采集的血浆或血清样本在无菌条件下分装 ,0、 5-1 mL/ 每管 ,用螺纹口管 ,-80℃保存。d)手术前后血浆或血清 ,明确临床诊断后在术前取血 ,术后第 14 天或出院前取血。 化疗前后血浆或