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蒽酮比色法测定可溶性糖 一、原理： 糖在浓硫酸作用下， 可经脱水反应生成糖醛， 生成的糖醛或羟甲基糖醛可与 蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物， 在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质， 在可见光区的吸收峰为 630nm，可在此波长下 进行比色，故可用于糖的定量。 二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料 阴干野扁桃果实 （二）仪器设备 分光光度计、水浴锅、具塞刻度试管、移液管、容量瓶、定性滤纸等 （三）试剂 浓硫酸（比重 1.84）、分析纯蔗糖、分析纯蒽酮、乙酸乙酯 蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮 1g，溶于 50ml 乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中， 在黑暗中可保存数周，用时微热溶解结晶。 三、实验步骤 （一）标准曲线 1、1%蔗糖标准液 将分析纯蔗糖在 80℃下（2h）烘至恒重，精确称取 1.000g ，加少量水溶解， 转入 100ml 容量瓶中，加入 0.5ml 浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。 2、100 μg/L 蔗糖标准液 精确吸收 1%蔗糖标准液 1ml 转入 100ml 容量瓶中，加水至刻度。 3、标准曲线 取 20ml 刻度试管 11 支，从 0-10 分别编号，按下表加入溶液和水。 试剂 0 1、2 3、4 5、6 7 、8 9、 10 100 μg/L 蔗糖液 /ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水 /ml 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 然后按顺序向试管中加入 0.5ml 蒽酮乙酸乙酯试剂和 5ml 浓硫酸，充分振荡，立 即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温 1min，取出后自然冷却至室温，以空 白作参比，在 630nm波长下测其吸光度，的数据如下： 吸光度 0 0.18 0.35 0.53 0.70 0.90 蔗糖含量 0 20 40 60 80 100 标准曲线 y=112.12x+0.2923 R2=0.9995 1.00 0.90 0.80 0.70 度 0.60 光 0.50 吸 0.40 0.30 0.20 0.10 0.00 0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 120.00 蔗糖含量 （二）可溶性糖的提取 1、提取 取野扁桃样品，擦净表面污物，称取果肉、果仁各 5 份（共 10 组）（详重见 下表）分别放入 10 支刻度试管中，加 5ml 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提 取 30min，提取液滤入 25ml 容量瓶，反复漂洗试管残渣，定容至刻度。 2、显色测定 吸取样品提取液 0.5ml 于 20ml 刻度试管中，加蒸馏水 1.5ml 。按顺序向试 管中加入 0.5ml 蒽酮乙酸乙酯试剂和 5ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸 水浴中，逐管均准确保温 1min，取出后自然冷却至室温， 以空白作参比，在 630nm