台盼蓝染色实验原理及步骤.docxVIP

台盼蓝染色实验原理及步骤 台盼蓝染色实验原理及步骤 PAGE / NUMPAGES 台盼蓝染色实验原理及步骤 台盼蓝染色实验原理 台盼蓝（ Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完满性，还常 用于检测细胞可否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。 分子式： C34H24N6O14S4Na4 ，分子量 : ，可溶于水（ 10mg/ml) 。 实验原理： 正常的活细胞，胞膜结构完满，能够排斥台盼蓝，使之不能够够进 入胞内；而丧失活性或细胞膜不完满的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼 蓝染成蓝色。平时认为细胞膜完满性丧失，即能够为细胞已经死亡。因此， 借助台盼蓝染色能够特别简略、快速地区分活细胞和。台盼蓝是组织和中最 常用的死细胞判断染色方法之一。注意也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后， 经过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。 台盼蓝染色只需 3-5 分钟即可完成，并且操作特别简单。 实验步骤： 1、配制 4%台盼蓝：称取 4g 台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至 100ml，用滤 纸过滤， 4℃保存。使用时用 PBS稀释至 %。 2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作合适稀释。 3、染色：细胞悬液与 %台盼蓝溶液以 9:1 混杂混匀。（终浓度 %） 4、计数：在 3 分钟内，分别计数活细胞和死细胞。 5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。 6、统计细胞活力：活细胞率（ %）= 活细胞总数 / （活细胞总数 +死细胞总数） ×100% 注意： 保存条件：室温保存。 有潜藏致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。