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炎症性肠病基因治疗进展 【关键词】炎性肠疾病基因治疗 0引言 溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis, UC)和克罗恩病(Crohn sdisease, CD)都属于炎症性肠病(inflammatoryboweldisease, IBD), 其发病可能由感染、遗传、免疫等多种因素相互作用所致?传统观念认 为通过基因转移替代缺陷基因的基因治疗只适用于致病基因明确的疾 病，目前慢性炎症性疾病和自身免疫性疾病也被纳入了基因治疗的范 围，可通过基因转移使机体表达免疫相关蛋白质,从而下调致病的炎症 和免疫反应，上调保护性反应?相对于囊性纤维化、重症联合免疫缺陷 和肿瘤,IBD的基因治疗尚处于起步阶段?本文就IBD的基因治疗作一 概述. 1IBD的免疫病理机制和肠干细胞 CD的肠黏膜炎症以1型辅助性T细胞(Thl)型CD4+淋巴细胞占主 导地位，而UC则主要是由Th2型CD4+淋巴细胞介导的?尽管CD和UC 发生的机制并不完全相同，但最终的肠壁损伤均可归咎于巨噬细胞、粒 细胞等炎性细胞及其产生的炎性细胞因子?一方面，淋巴细胞、巨噬细 胞在肠道局部聚集并释放各种促炎细胞因了，如TNF a , 口细胞介素 (IL) 6, IL 8, IL 12, IL 18等,其中多数与疾病活动性呈正 相关；另一方面，抗炎细胞因子如IL 10, IL 4,转化生长因子(TGF) 0等的分泌相对不足?这种促炎细胞因子和抗炎细胞因子Z间的失 衡促进和加剧了肠壁的炎症反应?细胞因子失衡可由Thl/Th2细胞比 例失衡引起，乂可反馈性地加重Thl/Th2细胞失衡,形成恶性循环，因 此被视为IBI)发病机制中的重耍环节?肠上皮细胞不断更新，衰老的细 胞脱落至肠腔，新的细胞则由位于肠隐窝底部的干细胞不断补充，因此 位于肠腺底部的干细胞成了基因治疗的最佳靶细胞?但是肠干细胞缺 乏明确的形态学特征或理化特性，目前还无法与其它肠上皮细胞鉴别, 因此无法直接证明目的基因已成功转移至干细胞?给予携带目的基因 的载体后,需耍对干细胞成功地进行基因修饰，肠上皮细胞才能持久稳 定地表达冃的基因?腺相关病毒(AAV)载体能使肠上皮细胞于口服感染 后Imo内稳定高效地表达目的基因?予免疫缺陷鼠静脉注射5型重组腺 病毒(AD5)载体，亦发现结肠上皮细胞长时间表达目的基因，而消化道 其他部位目的基因表达阴性?肠道相关淋巴组织内的免疫细胞无疑是 IBD基因治疗中最受关注的靶细胞,但由于肠道黏膜上皮屏障的存在, 载体不能有效到达固有层.M细胞是存在于黏膜集合淋巴结滤泡顶部 上皮屮的一种特殊细胞，其主要功能是将肠腔内抗原和病原体跨上皮 转运至上皮下淋巴组织?可利用M细胞能广泛摄取各种抗原物质的功 能,及其与免疫细胞Z间的对话方式，通过M细胞将载体导入黏膜淋巴 组织，从而调节局部黏膜免疫反应和机体的系统免疫反应［1 ］?有实验 表明AAV载体能感染肠道固有层内细胞，并使17%?19%的固有层细胞 于感染后6mo内持续表达目的基因. 2 口的基因转移至胃肠道组织 实验表明［2］，阻断小鼠肝动脉和门静脉后,经眶后静脉丛予重组 腺病毒载体,30min后恢复肝脏血供，肠壁血管、血管周围组织和小肠 绒毛持续表达目的基因达数周之久?局部了经包装的质粒、脂质体、逆 转录病毒、慢病毒、腺病毒和AAV载体均能将目的基因转导至肠道黏 膜,且黏液溶解剂(二硫苏糖醇、N 乙酰半胱氨酸)和蛋白酶体调节剂 (MG101)能促进转导效率?上述载体屮，以AAV载体系统的应用前景最 广阔.重组AAV(rAAV)载体去除了所有编码序列,只保留145bp的末端 重复序列，不含任何病毒基因，感染细胞后，前病毒DNA定向整合至19 号染色体的AAVS1区域?在人类基因治疗的常用病毒载体中,rAAV是0 前唯一没有引起宿主病理反应的载体[3]?实验表明，以AAV载体对空 腹大鼠灌胃6h后，胃十二指肠和近端空肠固有层细胞开始表达目的基 因，并能持续稳定表达6mo;虽然未观察到结肠有目的基因表达，但是 可以推测灌肠能使目的基因被转导至结肠固有层细胞?此外，虽然没有 直接证据表明AAV载体能感染肠干细胞，但除固有层外,肠上皮细胞亦 表达冃的基因Imo. AD5是体内实验使用最多的载体，该载体由于El缺 失造成病毒复制缺陷?腺病毒载体可高效感染多种靶细胞，对分裂期细 胞和增殖停止期细胞均有很高的导入效率，这是逆转录病毒载体所不 具备的?据报道，经十二指肠饲管予大鼠E1缺失的重组腺病毒载体后, 目的基因能有效导入十二指肠、空肠和回肠上皮细胞.以E1/E3缺失的 重组腺病毒载体灌肠后,结肠上皮细胞能高效表达冃的基因?而且炎症 性肠病的基因治疗AD5载体感染IBD患者肠上皮细胞的效率远高于非 TBI)患者[4] ?但是经消化道予腺病毒载体主要感染的