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炙甘草药材指纹图谱探究 ［摘要］采用 Agilent TC-C18 (2)色谱柱(4.6 mmX250 mm, 5 um),以乙睛-水(含0.2%甲酸)为流动相 梯度洗脱建立了炙甘草药材的HPLC指纹图谱，并采用 HPLC-MS/MS对19个共有峰中的6个色谱峰进行了定性鉴别。 采用该方法测定了 10批不同产地的炙甘草药材，其相似度 在0.72?0.99。该方法精密度、稳定性和重复性良好，该研 究为炙甘草药材的质量控制提供了参考。 ［关键词］炙甘草；HPLC；指纹图谱；质量控制 ［收稿日期］2014-02-11 ［基金项目］国家‘重大新药创制”科技重大专项 (2011ZX09201-201-13 , 2012Z001-004 , 2013ZX09508-105) ［通信作者］乔善义，研究员，硕士生导师，研究方向 为中药活性成分及质量控制，Tel: (010) E-mail： crbj611202@sina. com ［作者简介］孙磊，实验师，Tel: (010) E-mail： rubyslsl@126? com 甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch. 的干燥根及根茎除去杂质、洗净、润透并干燥的炮制品，炙 甘草是生甘草按照蜜炙法炒至黄色至深黄色的炮制品［1］。 甘草素有“十方九草”之谓，具有清热解毒，补气益脾胃， 润肺祛痰，缓急止痛，调和诸药的作用［2］,而炙甘草虽基 原与甘草相同，但经炮制后，其性味功效也有区别，炙甘草 具有补脾和胃、益气复脉的功效，与生品相比增强了补脾益 气的作用［3］。 中药化学成分指纹图谱是指中药材或中成药经适当的 前处理后，采用一定的分析手段得到的能够标志该中药材或 中成药特征的色谱图或光谱图。现行炙甘草药材的质量标 准，仅测定甘草昔和甘草酸这2个指标成分的含量，往往不 能全面的反应炙甘草的质量，指纹图谱技术从中药药效来自 多种化学物质综合作用的观点出发，与测定单一组分相比， 能够提供更丰富、有效的质量信息，因此指纹图谱技术可以 更客观、科学、合理地进行中药质量控制。本课题组对中药 经典方剂小柴胡汤的指纹图谱进行了系统研究［4-5］,炙甘 草是小柴胡汤方剂的重要组成部分，对各单味药材的HPLC 指纹图谱进行研究是实现对中药方剂全面质量控制的重要 环节。对于炙甘草药材的指纹图谱研究，已有部分文献进行 了报道［3, 6］,但对于炙甘草指纹图谱中共有峰的定性鉴别, 尚未见相关报道，本文采用HPLC,建立了炙甘草药材的高效 液相色谱指纹图谱，同时采用HPLC-MS/MS方法对部分色谱 峰进行了指认，为炙甘草指纹图谱中的成分确认及其质量控 制提供了参考。 1材料 日立L-2000高效液相色谱仪；Agilent 6330离子阱质 谱仪，配有Agilent 1100液相色谱仪；北京长风HW - SY-K4 型智能电热恒温水浴锅；KQ2200E型超声清洗器(昆山市超 声仪器有限公司)；东京理化N-1001D-WA旋转蒸发仪； Sartorius-BS 124S电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)； 安徽科大中佳SC-3614型离心机。 水为娃哈哈纯净水；乙惰和甲醇均为色谱纯；其余试剂 为分析纯。10批不同来源炙甘草见表1。 2方法与结果 1对照品溶液制备 称取上述G1?G10号炙甘草样品各10 g,加入10倍量 蒸馆水回流提取2次，每次2 h,过滤，合并2次滤液。将 滤液浓缩至1 mL药液相当于6 g生药，加入适量无水乙醇, 至溶液中乙醇质量分数为70%,均匀搅拌，静置过夜，离心 (25 min, 2 500 r ? min-1),用70%乙醇洗涤沉淀,离心(25 min, 2 500 r ? min-1),合并上清，浓缩除去乙醇，将得到 的提取物70 °C真空干燥，得到炙甘草样品。精密称取上述 样品0. 030 0 g,用50%色谱纯甲醇定容至10 mL量瓶中， 0.45 um微孔滤膜过滤，得到炙甘草供试品溶液，进行HPLC 分析。 2.2色谱条件 色谱柱为 Agilent TC-C18 (2)色谱柱(4. 6 mmX250 mm, 5 um)；以乙月青(A)-水(B,含0.2%甲酸)为流动相，梯 度洗脱，见表2；流速1. 0 mL ? min-1 ；检测波长265 nm； 柱温35 °C；进样量20 uLo 2.3质谱条件 离子源为ESI源，负离子扫描模式，雾化气压力为 2.7X105 Pa,干燥气流量为10. 0 L ? min-1,离子源温度为 350 °C,碎裂电压1。梯度洗脱程序同2. 2。 2.4指纹图谱的建立与共有指纹峰的指认 2. 4.1指纹图谱的建立取2. 1项制备的供试品溶液各 20 UL,按照2.