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2021年凝胶电泳实验报告模板 2021年凝胶电泳实验报告模板 PAGE / NUMPAGES 2021年凝胶电泳实验报告模板 重庆大学硕士专业试验教学 试验汇报书 试验课程名称: 凝胶电泳试验 试验指导老师: 学 院: 专业及类别: 生物学 学 号: 姓 名: 试验日期: 成 绩: 重庆大学硕士院制 一、 试验目 1.了解凝胶电泳分类及琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳试验基础原理。 2.熟练琼脂糖凝胶电泳试验基础操作。 3.经过试验了解凝胶电泳试验注意事项并在以后试验中尽可能避免。 4.利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、 浓度和分子量以及分离大小不一样DNA片段。 5.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA和蛋白分子量大小方法。 二、 试验材料、 用具及试剂 1.材料: 菌落PCR产物（待检测DNA片段）; 2.用具: ①琼脂糖凝胶电泳: 电泳仪, 水平板型电泳槽, 电子天平, 微量移液器（10μl）, 枪头, 三角瓶, 点样板, 梳子, 微波炉, 凝胶成像仪; ②聚丙烯酰胺凝胶电泳: 垂直板电泳槽, 稳压稳流电泳仪, 梳子; 3.试剂: 琼脂糖, 1×TAE缓冲液, 载样缓冲液（Loading buffer）, goldviwe染料, DL5,000 DNA Marker (Takara)。 三、 试验原理 核酸凝胶电泳是分子克隆关键技术之一, 用于分离、 判定和纯化DNA或RNA片段, 含有以下优点: 便于分离、 便于检测和便于回收。其工作原理相对而言比较简单、 关键用到了物理学电荷理论。 当一个分子被放置在电场当中时, 它们就会以一定速度移向合适电极, 这种电泳分子在电场作用下迁移速度, 叫做电泳迁移率。它同电场强度和电泳分子本身所携带净电荷数成正比。也就是说, 电场强度越大、 电泳分子所携带净电荷数量越多, 其迁移速度也就越快, 反之则较慢。因为在电泳中使用了一个无反应活性稳定支持介质, 如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺胶等, 从而降低了对流运动, 故电泳迁移率又是同分子摩擦系数成反比。已知摩擦系数是分 子大小、 极性及介质粘度函数, 所以依据分子大小不一样、 组成或形状差异, 以及所带净电荷多少, 便能够经过电泳将蛋白质或核酸分子混合物中多种成份相互分离开来。在生理条件下 , 核酸分子糖-磷酸骨架中磷酸基因呈离子状态从这种意义上讲 , D N A 和RNA多核苷酸链可叫做多聚阴离子 ( Polyanions ) 。所以, 当核酸分子被放置在电场中时, 它们就会向正电极方向迁移。因为糖- 磷酸骨架结构上反复性质, 相同数量双链DNA几乎含有等量净电荷, 所以它们能以一样速度向正电极方向迁移。在一定电场强度下, DNA分子这种迁移速度, 亦即电泳迁移率, 取决于核酸分子本身大小和构型, 分子量较小DNA分子比分子量较大DNA 分子迁移要快些。这就是应用凝胶电泳技术分离DNA片段基础原理。 聚丙烯酰胺凝胶电泳, 普遍用于分离蛋白质及较小分子核酸。琼脂糖凝胶孔径较大适适用于分离同工酶及其亚型, 大分子核酸等应用较广。琼脂糖和聚丙烯酰胺能够制成多种形状、 大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA度大小范围较广,不一样浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kbDNA段。琼脂糖通常见水平装置在强度和方向恒定电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果很好,其分辩力极高,甚至相差1bpDNA段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快,可容纳相对大量DNA,但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采取垂直装置进行电泳。现在,通常试验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA电泳。 3.1 凝胶电泳分类 根据分离物质来分凝胶电泳能够分为核酸凝胶电泳和蛋白质凝胶电泳; 根据分离介质来分能够分为琼脂糖凝胶电泳技术和PAGE凝胶电泳。此次试验我们采取按介质分类方法来学习。 3.1.1琼脂糖凝胶电泳 　 琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质一个电泳方法。其分析原理与其她支持物电泳最关键区分是: 它兼有“分子筛”和“电泳”双重作用。 　　琼脂糖凝胶含有网络结构, 物质分子经过时会受到阻力, 大分子物质在涌动时受到阻力大, 所以在凝胶电泳中, 带电颗粒分离不仅取决于净电荷性质和数量, 而且还取决于分子大小, 这就大大提升了分辨能力。但因为其孔径相当大, 对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道, 现广泛应用于核酸研究中。 　　蛋白质和核酸会依据pH不一样带有不一样电荷, 在电场中受力大小不一样, 所以跑速度不一样, 依据这个原理可将其分开。电泳缓冲液pH在6-9之间, 离子强度0.02-0.05为最适。常见1%琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bpDNA片段,