SDS-PAGE电泳实验步骤.docVIP

垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 一、实验目的 学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 法(SDS — PAGE)测定蛋白质的分子量的 原理和基本 操作技术。 二、实验原理 蛋白质是两性电解质，在一定的 pH 条件下解离而带电荷。当溶液的 pH 大于蛋白 质的等电点(pl)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的 pH小于蛋 白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动 的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度 等。 聚丙烯酰 胺凝胶 是由一 定量 的丙烯 酰胺和 双丙 烯酰胺 聚合而 成的 三维网 状孔结 构。本实验 采用不连 续凝 胶系 统，调 整双 丙烯 酰胺用 量的 多少 ，可制 成不 同孔 径的 两 层凝 胶；这 样， 当含有 不同分 子量 的蛋白 质溶 液通过 这两 层凝胶 时，受 阻滞 的程 度 不同 而表现 出不 同的迁 移率。 由于 上层胶 的孔 径较大 ，不 同大小 的蛋白 质分 子在 通 过大 孔胶时 ，受 到的阻 滞基本 相同 ，因此 以相 同的速 率移 动；当 进入小 孔胶 时， 分子量 大的蛋 白质 移动速 度减慢 ，因 而在两 层凝 胶的界 面处 ，样品 被压缩 成很 窄的 区带。 这就是 常说 的浓缩 效应和 分子 筛效应 。同 时，在 制备 上层胶 (浓缩胶 )和下层 胶(分离胶