中国大豆根瘤菌遗传多样性和系统发育分析.pdfVIP

中文摘要 本研究以自中国7个大豆生产区和9个大豆品种分离的52株大豆根瘤 为研 究对象，并以23个根瘤 分类的标准 株为参照，采用表型特征、宿主亲和性试 验、16SrDNAPCR-RFLP，16SrDNA全序列分析、16S一23S rDNA IGSPCR-RFLP、 RAPD、REP．ERIC PCR和DNA-DNA杂交，系统地研究了我国7个地区大豆根瘤 菌的遗传多样性和系统发育。 结果表明：在供试52株根瘤 中，有29株属于快生型大豆根瘤 ，23株属 于慢生型大豆根瘤 。用IGS PCR-RFLP、RAPD和REP-ERIC PCR揭示了快、慢 生型大豆根瘤菌的内部存在着高度的遗传多样性。 一f依据表型特征的结果能够肯定地将快、慢生型大豆根瘤菌分为两大类群，29 株供试快生型大豆根瘤菌均能与CCBAUll0有效地分开，并都和USDA205以较高 的高源值聚在一起。23株供试慢生大豆根瘤菌也能与USDA76分开，分别与USDA6 和USDAll0聚在一起。但在快、慢生型大豆根瘤菌内部各菌株之间的差异较小， 除慢生菌部分菌株的相似性与地理来源有相关性外，在区分亲缘关系较近的菌株之 间的亲缘关系时有一定的局限性。宿主亲和性试验能将所有供试菌分成两种类型： 一种能在所有宿主植物上结瘤而显示较宽的宿主范围。而另一种只能在部分宿主植 物上结瘤而表现较窄的宿主范围。质粒快速检测结果表明：慢生型大豆根瘤菌均不 含有质粒，快生型大豆根瘤菌均有1-4个质粒，质粒类型与宿主亲和性也有一定的 相关性。 为了从遗传基础上比较供试 株的多样性和系统发育关系，本研究首先采用 16S rDNA PCR-RFLP和全序列分析来确定供试 在已知根瘤 种、属中的系统发 育位置，结果表明供试29株快生型大豆根瘤菌与中华根瘤菌属S．fredii和 S．xinfiangensis都很靠近。供试23株慢生型大豆根瘤 也位于慢生型根瘤 属和 B．japonicum与B．1iaon#19ensis聚在一块。其中BAI与丑liaoningensis的16S rDNA 序列只有2个碱基的差异。 IGS PCK-RFLP、RAPD和REP．ERIC．PCR均能有效地区分快、慢生型大豆根 瘤 ，而且都表现了明显的种内多样性、并可据此将他们细分成不同的亚群。就分 辨力水平高低而言。RAPD和REP．ERIC的分辨力较高。IGS PCR-RFLP揭示 株 与宿主植物的相关性，而RAPD和REP．ERIC-PCR则表明 株与地理来源的关系 更为密切。几种分类方法也表现了一定程度的不一致性。这表明在分类研究中多种 方法结合使用的必要性。 DNA-DNA杂交试验和以上多种方法的研究结果，本研究建议将29株供试快 生型大豆根瘤 归入费氏中华根瘤 中，将23株慢生型大豆根瘤 则归入大豆慢 生根瘤菌种中。＼， J 关键词：大豆根瘤 16 R- - - ＆堪n、世鎏：ERIc ￡g垦2全坠』型A，茹崆多样性系统发育 ABSTRACT Fifty．two soyrbean rhizobia isolated from root nodules of 9 soybean cultivars of soil samples collected from seven different sites in China were studied by phenotypic characteristics，host specificity，16S rDNA PCR—R_FLP,16S rDNA IGS