液相色谱：3 色谱基本理论.pptxVIP

色谱基本理论 柱效参数 理论塔板数(theoretical plate number，N)——用于定量 表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。 马丁（Martin）和欣革（Synge）最早提出塔板理论，将色 谱柱比作蒸馏塔，把一根连续的色谱柱设想成由许多小段组 成。在每一小段内，一部分空间为固定相占据，另一部分空间 充满流动相。组分随流动相进入色谱柱后，就在两相间进行分 配。并假定在每一小段内组分可以很快地在两相中达到分配平 衡，这样一个小段称作一个理论塔板（theoretical plate）， 一个理论塔板的长度称为理论塔板高度（theoretical plate height）H。经过多次分配平衡，分配系数小的组分，先离开蒸 馏塔，分配系数大的组分后离开蒸馏塔。由于色谱柱内的塔板 数相当多，因此即使组分分配系数只有微小差异，仍然可以获 得好的分离效果。 N取决于固定相的种类、性质（粒度、粒径分布等）、填 充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的 性质。如果峰形对称并符合正态分布，N可近似表示为： N＝＝5.54(tR/ W ) 2 1/2 tR是组分的保留时间； W1/2是半峰宽 N为常量时，W1/2随tR成正比例变化。在一张多组分色谱 图上，如果各组分含量相当，则后洗脱的峰比前面的峰要逐 渐加宽，峰高则逐渐降低。 用半峰宽计算理论塔数比用峰宽计算更为方便和常用，因 为半峰宽更易准确测定，尤其是对稍有拖尾的峰。 N与柱长成正比，柱越长，N越大。用N表示柱效时应注明 柱长，如果未注明，则表示柱长为1米时的理论塔板数。（一 般HPLC柱的N在1000以上。） 理论塔板高度(theoretical plate height，H)——每单 位柱长的方差。实际应用时往往用柱长L和理论塔板数计算： H＝L/N 分离参数 分离度(resolution，R)——相邻两峰的保留时间之 差与平均峰宽的比值。也叫分辨率，表示相邻两峰的分 离程度。 1) 峰宽分离度（RW） 峰宽分离度RW定义为相邻二峰保留值之差与其各自 峰宽总和之半的比值(见图1-5)，其表达式如下 分离度(resolution，R)——相邻两峰的保留时间之 差与平均峰宽的比值。也叫分辨率，表示相邻两峰的分 离程度。 1) 峰宽分离度（RW） 峰宽分离度RW定义为相邻二峰保留值之差与其各自 峰宽总和之半的比值(见图1)，其表达式如下： RW = 2d/(y +y ）= 2（t -t ）/(y +y ） w1 w2 R2 R1 w1 w2 yW1 yW2 图1峰宽分离度（RW）的定义 2) 半峰宽分离度(R1/2) 当二峰分离不好，峰底宽不易测量时，可用半峰宽分离 度R 来计算。若二峰的半峰宽分别用y 和y 表示 1/2 时，半峰宽分离度R 的表达式如下 1/2(1) 1/2(2) 1/2 R1/2＝2（t -t ）/(y + y ） R2 R1 1/2(1) 1/2(2) R＝1时，两峰基本分离，裸露峰面积为95.4%，内侧 峰基重叠约2%。 R＝1.5时，裸露峰面积为99.7%。R≥1.5称为完全分 离。《中国药典》规定R应大于1.5。 R=1 分离程度达98% R≥1.5 完全分离≥99.7， 也叫基线分离 R1 二峰明显重叠 提高分离度常用的途径有两种： 1）增加塔板数。 方法之一是增加柱长，但这样会延长保留时间、增 加柱压。更好的方法是降低塔板高度，选择柱效高的色 谱柱。 2）增加选择性。 一般可以采取以下措施来改变选择性： a. 改变流动相的组成及pH值； b. 改变柱温； c. 改变固定相。