慢病毒介导RNA干扰人DC-SIGN表达对树突状细胞成熟及.docVIP

慢病毒介导RNA干扰人DC-SIGN表达对树突状细胞成熟及 功能影响 王建军 郭述良 李兰 邬亭亭 [摘要] 目的 研究慢病毒介导RNA干扰DC-SIGN分子表达及干扰后对树突状细胞（dendritic cells,DCs）成熟度及功能的影响。方法 分离健康人外周血单核细胞，用GM-CSF和IL-4刺激诱导DCs。培养第四天分三组即RNA干扰组、阴性对照组和空白对照组，按实验设计加入病毒共孵育12h后换液，继续培养60h后用荧光显微镜观察转染效率及荧光强度，培养第六天加LPS刺激成熟。第七天收集细胞做RT-PCR检测DC-SIGN mRNA水平，Western Blot检测DCs总DC-SIGN表达DC-SIGN蛋白水平，流式细胞仪检测DCs表面DC-SIGN表达水平水平，ELISA检测DCs培养上清液中IL-12,IL-10分泌水平水平，混合淋巴细胞反应检测DCs对CD4+ T淋巴细胞刺激增殖能力能力的影响。 结果 （1）荧光显微镜显示感染复数（MOI）为20时，DCs感染病毒的效率达85％。（2）RT-PCR证实RNA干扰后DC-SIGN mRNA表达水平为0.2525±0.1396下面均如此修改，显著低于另两组[数据不能用括号。下同。(0.5722±0.1909),(0.5487±0.1193)],差异有统计学意义(F=8.14