HBVcccDNA检测方法及应用价值的研究进展.pdf

HBV cccDNA 检测方法及应用价值的研究进展 【文章编号】 1004-7484 （2014 ）05-2942-02 我国是肝炎大国，约有一亿三千万慢性乙肝携带者，由 于慢性乙型肝炎是肝硬化和肝细胞癌的高危因素 [1] ，并且在 我国每年约有 30 万人死于肝硬化和原发性肝癌 [2] 。因此对 于乙型肝炎的诊断、治疗显得尤为重要，但是在治疗过程中 存在着用药疗程、耐药、停药后复发等一系列问题导致肝炎 久治不愈，主要原因之一是由于 HBV 共价闭合环状 DNA （cccDNA ）的存在及消除困难。本文主要对 HBV cccDNA 检测方法及其在临床上应用价值进行阐述。 1 cccDNA 的分子结构 HBV 是嗜肝细胞病毒， 当其感染进入肝细胞后， 在细胞 质脱衣壳并释放松弛环状 DNA （rcDNA ）， rcDNA 是两条 链均不闭合， 负链较长的 DNA 分子，随病毒复制进行， rcDNA 进入细胞核，利用宿主细胞胞核中 DNA 聚合酶、拓扑异构 酶等形成 HBV 共价闭合环状脱氧核糖核酸 （covalently closed circular DNA ， cccDNA ），再以 cccDNA 为模板，在 RNA 聚合酶及逆转录酶的作用下合成前基因组 RNA 和 mRNA ， 进一步合成负链 DNA 分子及核心蛋白、脂蛋白等蛋白质， 最后，以负链 DNA 为模板，合成正链 DNA ，正负链组成新 的 rcDNA ，一部分由脂蛋白包绕形成 HBV 病毒颗粒释放， 另一部分变成 cccDNA 来维持胞核内 cccDNA 的水平。 HBV 感染过程如图一所示 [3] ： 新合成的 HBV 会感染新的肝细胞重复上述过程，当胞 核中 cccDNA 的含量过高时，直接以 cccDNA 为模板合成 HBV ，使 cccDNA 动态维持在某一水平，在肝内形成了 “cccDNA 池”。可以看出 cccDNA 是 HBV 复制的重要中间 体，且 cccDNA 对常规的抗病毒药具有抵抗作用 [4] ，当抗病 毒药物使血清中 HBV DNA 水平下降后， 肝细胞中的 cccDNA 又会“生产”新的病毒并释放， HBV 又会继续感染肝细胞， 重复感染过程，又使肝内 cccDNA 也得到补充。 由于 cccDNA 的存在且难以清除是导致肝炎久治不愈的 原因之一，所以对于 cccDNA 的检测有其必要性，下面对其 检测方法进行阐述： 2 检测方法 2.1 Southern Blot 方法 最经典的基因分析方法，基本过程包括：将电泳分离后 的 DNA 片段转移到硝酸纤维膜等固相支持物上，用已标记 的探针