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RP-HPLC-MS 方法分析几种蛋白的
胰蛋白酶酶解多肽产物的条件优化
张婷婷 金燕
赛默飞世尔科技 （中国 ）有限公司
引言
Time/min A/% B/%
在生物体内 ，蛋白的翻译后修饰过程是蛋白发挥各种不 0 98 2
40 40 60
同生化功能的基础 ，这些翻译后修饰包括糖基化 、氧化 、
40.1 20 80
甲基化和磷酸化等 。作为生物药物的蛋白在生产 、运输 、 45 20 80
保存过程中会产生变体 ，从而影响到药物的活性和稳定 45.1 98 2
60 98 2
性 。 因此蛋白的肽谱经常被用来研究蛋白的翻译后修饰
过程以及蛋白变体的存在 。 同时也用于生物制药行业蛋
流速 ：0.5 mL/min (ID=3mm), 0.25 mL/min (ID=2.1mm)
白产品初级结构的确认 [1-3] ，从而更好地控制生化药品的
分析时间 ：60 min
质量和确保病人的用药安全 。
检测器波长 ：214 nm
本文采用胰蛋白酶酶解蛋白的方法 ，得到各种蛋白的肽
进样量 ：20 μL
谱 ， 比较几款不同的反相色谱柱在分离蛋白酶解片断时
柱温 ：35 ℃
的差异 ，同时借助质谱 ，评价蛋白酶解产物 - 多肽在酸性
与质谱兼容的液相色谱条件
或者碱性流动相条件下表现出分离性能的差异 。
色谱柱 ：1- Acclaim 120 C18, 3mm×150mm, 3μm (P/
仪器配置
N063691,S/N001119) ；
Thermo Ultimate 3000系统 ：泵 ：DGP-3600RS； 自动进样器 ：
2-Acclaim 120 C8, 2.1mm×100mm, 3μm (P/N059123,
WPS-3000TRS；柱温箱 ：TCC-3000RS；检测器 ：DAD-3000RS
S/N001337) ；
质谱 ：TSQ Vantage
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