细菌回复突变试验.pdfVIP

附件 9 细菌回复突变试验 Bacterial Reverse Mutation Assay 1 范围 本规范确定了细菌回复突变试验的基本原则、要求和方 法。 本规范适用于化妆品原料及其产品的基因突变检测。 2 定义 2.1 回复突变 reverse mutation 细菌在化学致突变物作用下由营养缺陷型回变到原养型 (prototroph) 。 2.2 基因突变 gene mutation 在化学致突变物作用下细胞 DNA 中碱基对的排列顺序发生 变化。 2.3 碱基置换突变 base substitution mutation 引起 DNA 链上一个或几个碱基对的置换。 碱基置换有转换 (transition) 和颠换 (transversion)两种形式。 转换是 DNA 链上的一个嘧啶被另一嘧啶所替代，或一个嘌 呤被另一嘌呤所代替。 颠换是 DNA 链上的一个嘧啶被另一嘌呤所替代，或一个嘌 呤被另一嘧啶所代替。 2.4 移码突变 frameshift mutation 引起 DNA 链上增加或缺失一个或多个碱基对。 2.5 细菌回复突变试验 bacterial reverse mutation assay 利用一组组氨酸或者色氨酸缺陷型试验菌株测定引起细菌 碱基置换或移码突变的化学物质所诱发的氨基酸缺陷型 →原养 型回复突变的试验方法。 2.6 S9 经多氯联苯 (PCB 混合物 )或苯巴比妥钠和 β-萘黄酮结合诱 导的大鼠制备肝匀浆，在 9000g 下离心 10min 后的肝匀浆上清 液。 3 原理 鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株不能合成组氨酸， 故 在缺乏组氨酸的培养基上， 仅少数自发回复突变的细菌生长； 大肠杆菌色氨酸营养缺陷型菌株不能合成色氨酸， 故在缺乏色 氨酸的培养基上， 仅少数自发回复突变的细菌生长。 假如有致突 变物存在， 则营养缺陷型的细菌回复突变成原养型，因而能生 长形成菌落，据此判断受试物是否为致突变物。 某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变， 故需加入 经诱导剂诱导的大鼠肝制备的 S 混合液。 9 4 仪器和设备 培养箱、恒温水浴、振荡水浴摇床、压力蒸汽消毒器、干热 烤箱、低温冰箱（－ 80℃ ）或液氮生物容器、普通冰箱、天平 (精密度 0.1g 和 0.0001g) 、混匀振荡器、匀浆器、菌落计数器、 低温高速离心机，玻璃器皿、生物安全柜等。 5 培养基和试剂 5.1 0.5mmol/L 组氨酸－ 0.5mmol/L 色氨酸－ 0.5mmol/L 生物 素溶液 成分： L-组氨酸（ MW155 ） 78mg D-生物素（ MW244 ） 122mg L- 色氨酸（ MW204 ） 102mg