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造血干细胞的研究现状 造血干细胞的研究现状简介 造血干细胞 (Hematopoietic Stem Cell ，HSC)是一种成体干细胞，是具有高度 自我更新能力和多向分化潜能的造血前体细胞，属于多能干细胞。造血干细胞主要 来源于三个渠道 : 骨髓、外周血和脐带血。一般可将血细胞的生成过程划分为三个 阶段 : 造血干细胞、造血祖细胞和在形态上可以辨认的各种幼稚血细胞。造血干细 胞采用不对称的分裂方式，平均每 57 天分裂一次。它一方面可以再生，另一方面 可以分化成髓红系干细胞和淋巴系干细胞，后两者又能分别分化成红细胞、巨核细 胞、淋巴细胞、树突状细胞、 NK细胞、粒细胞等一系列血细胞。造血系统不同阶 段受不同基因表达调控，造血分化也受到若干个随机细胞因子的调控。 造血干细胞的生物学特征 ?:( 一) 自我更新和自我维持能力 : 正常情况下，造血 干细胞经过不对称有丝分裂形成两个子代细胞，其中一个仍保持造血干细胞的全部 特征，这称为造血干细胞的自我更新或自我维持。自我更新使造血干细胞的数量和 质量维持不变。另一个子细胞在有丝分裂过程中特征发生改变，逐渐走向分化的途 径，维持循环的各种血细胞的数量。 ( 二) 高度增殖潜能 : 在骨髓中，造血干细胞大 约仅占骨髓 0.05%，且大多数处于 G0期。由于放、化疗造成造血细胞明显减少或 在某些动员剂的作用下，造血干细胞能大量分裂，从而有更多的造血干细胞进入分 裂周期。 ( 三 ) 多向分化潜能 : 造血干细胞不仅能分化为各系统的血细胞系，还具有 可塑性，可向某些非造血细胞转化，如神经细胞、骨骼肌细胞、肝脏细胞、血管内 皮细胞以及多种组织的上皮细胞等。造血干细胞的表面标志主要有 CD34抗原、 CD38抗原、 CD90抗原、 CD117抗原、 Sca1 抗原和 AC133抗原等，其中 CD34是分离 纯化造血干细胞的主要标志。利用这些表面标志，可将造血干细胞从造血组织中分 离出来，进行研究。 对于不同种类的造血干细胞，分离纯化保存的技术也有所差异。首先要在无菌 条件下在外周血、骨髓和脐血中采集造血干细胞，然后进行密度梯度离心，对单个 核细胞分离，还要对 CD34细胞分离，常用的方法有免疫磁珠法和流式细胞术等。 近 20 年来建立的造血干细胞的分选方法主要有 FACS、组织培养瓶铺展贴壁、亲和 吸附等，但都存在纯度不高、技术要求高、仪器设备昂贵、影响细胞活力、易于污 染等不足。目前最主要的分离方式还是免疫磁珠分离法，具有简单易行、分选效率 高、纯度高等优点。免疫磁珠是一种包被有单克隆抗体的磁性微粒，它可特异性地 与靶物质 ( 细胞、蛋白质、 DNA和细菌等 ) 结合，使之具有磁顺应性，继而在外加磁 场的作用下被滞留，从而与其他成分分离 ?。 分离出造血干细胞后，还要对其进行鉴定。在人类， CD34阳性细胞群具有长期 造血重建能力，推测绝大部分造血干细胞应为 CD34阳性。由于 CD34抗原在造血祖 细胞上也有表达，故常以一些在干细胞为阴性表达的抗原 ( 如 HLA-DR，CD38等) ， 对 CD34 阳性细胞群进行再分类，以识别出其中的造血干细胞。常用的造血干细胞 检测方法有 : 脾克隆形成法、外克隆形成法、长期培养启动细胞检测法、移植实验 法、流式细胞测量法等等 ?。 造血干细胞的冻存具有重要意义，可以减少传代次数，节省人力物力，储备细 胞资源。对不同来源的造血干细胞，要采用不同的冻存方法 ?。常见的冷冻保护剂 有二甲基亚砜 (DMSO)、甘油、乙二醇、甲醇、乙酰胺等。对于骨髓干细胞，冻存速 度以 1?/min 为好，若太快则会造成细胞死亡，也可加入少量白蛋白。外周血造血 干细胞采用分段降温，或用超速法。脐血造血干细胞与外周血类似。 造血干细胞的体外扩增和诱导分化具有重要意义。常见的体外扩