生物药物的分离纯化技术.pptxVIP

生物药物的分离纯化技术;研究如何从混合物中把一种或几种物质分离出来的科学技术，是一门应用性很强、科技含量较高的学科，涉及到物理、化学、生物学等方面的知识和操作技术。 ;第一节 绪 论;基本涵义;主要内容;基本原理;发展历史;生物分离的基本过程;发酵液 （培养液）;生物分离的各阶段的常用方法;细胞破碎 机械法：高压匀浆、高速珠磨、超声波破碎； 非机械法：化学法、酶解法、渗透压冲击法、冻结融化法、干燥法。;初步纯化 沉淀法、吸附法、萃取法、超滤法 高度纯化 吸附层析???亲和层析、凝胶层析、离子交换层析、电泳、结晶和重结晶。;成品加工 无菌过滤、去热原、干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、制剂。;生物分离技术的特点;生物分离方法的选择;第二节 发酵液的预处理;预处理的目的;预处理的方法;发酵液过滤特性的改变;改善发酵液过滤特性的物理化学方法;1.降低液体粘度 根据流体力学原理，滤液通过滤饼的速率与液体的粘度成反比，降低液体粘度（加水稀释法和加热法等）可有效提高过滤速率。注意加热温度与时间，不影响产物活性和细胞的完整性。;2.调节pH pH值直接影响发酵液中某些物质的电离度和电荷性质，适当调节pH值可改善其过滤特性。;3.凝聚与絮凝 采用凝聚和絮凝技术能有效改变细胞、细胞碎片及溶解大分子物质的分散状态，使其聚结成较大的颗粒，便于提高过滤速率。另外，还能有效地除去杂蛋白和固体杂质，提高滤液质量。;（1）凝聚 指在电解质作用下，由于胶粒之间双电层电排斥作用降低，电位下降，而使胶体体系不稳定的现象。 发酵液中的细胞、菌体或蛋白质等胶体粒子双电层的结构使胶粒之间不易聚集而保持稳定的分散状态。 ;主要是无机类电解质，大多为阳离子。 常用的凝聚剂电解质： 硫酸铝 Al2(SO4)3?18H2O； 氯化铝 AlCl3?6H2O; 三氯化铁 FeCl3; 硫酸亚铁 FeSO4·7H2O ； 石灰；ZnSO4；MgCO3;（2）絮凝 指在某些高分子絮凝剂存在下，基于桥架作用，使胶粒形成较大絮凝团的过程。 采用絮凝法可形成粗大的絮凝体，使发酵液较易分离。;;絮凝剂 是一种能溶于水的高分子聚合物，其相对分子质量可高达数万至一千万以上，长链状结构，其链节上含有许多活性官能团，包括带电荷的阴离子（如-COOH）或阳离子（如-NH2）基团以及不带电荷的非离子型基团。;它们通过静电引力、范德华引力或氢键的作用，强烈地吸附在胶粒的表面。 当一个高分子聚合物的许多链节分别吸附在不同的胶粒表面上，产生桥架联结时，就形成了较大的絮团，这就是絮凝作用。;工业上使用的絮凝剂可分为三类： 1）有机高分子聚合物，如聚丙烯酰胺类衍生物、聚苯乙烯类衍生物； 2）无机高分子聚合物，如聚合铝盐、聚合铁盐等； 3）天然有机高分子絮凝剂，如聚糖类胶粘物、海藻酸钠、明胶、骨胶、壳多糖、脱乙酰壳多糖等。;;（3）混凝 对于带负电荷的菌体或蛋白质来说，采用阳离子型高分子絮凝剂同时具有降低胶粒双电层电位和产生吸附桥架的双重机理； 对于非离子型和阴离子型高分子絮凝剂，要采用凝聚和絮凝双重机理才能提高过滤效果，这种包括凝聚和絮凝机理的过程，称为混凝。 ;4.助滤剂 一种不可压缩的多孔微粒，它能使滤饼疏松，滤速增大。 悬浮液中大量的细微胶体粒子被吸附到助滤剂的表面上，改变了滤饼结构，降低了过滤阻力。 常用的助滤剂有：硅藻土、纤维素、石棉粉、白土、炭粒、淀粉等，最常用的是硅藻土。;5.反应剂 加入反应剂和某些可溶性盐类发生反应生成不溶性沉淀，如CaSO4，AlPO4等。 生成的沉淀能防止菌丝体粘结，使菌丝具有块状结构，沉淀本身可作为助滤剂，且能使胶状物和悬浮物凝固，改善过滤性能。;发酵液的相对纯化;（2）杂蛋白 在采用离子交换和吸附法提取时会降低其交换容量和吸附能力， 在有机溶剂法或双水相萃取时，易产生乳化现象，使两相分离不清。 在常规过滤或膜过滤时，易使过滤介质堵塞或受污染，影响过滤效率。;高价无机离子的去除方法 Ca2+——草酸、草酸钠，→形成草酸钙沉淀； Mg2+——三聚磷酸钠，→形成三聚磷酸钠镁可溶性络合物； Fe2+——黄血盐，→普鲁士兰沉淀;杂蛋白的去除方法 等电点沉淀法 化合沉淀法 变性法 吸附法;等电点沉淀法 蛋白质一般以胶体状态存在于发酵液中。 在酸性溶液中带正电荷；在碱性溶液中带负电荷。 在某一pH下，净电荷为零，溶解度最小，称为等电点。 ;化合沉淀法 酸碱调节，使蛋白质与盐或离子形成沉淀。 在酸性溶液中，蛋白质与一些阴离子，如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐等形成沉淀； 在碱性溶液中，蛋白质与一些阳离子，如Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+和Pb2+等形成沉淀。;变性法 热变性：适于热稳定物质 大幅度调节pH：根据产物特性反向调节 加酒精、丙酮等有机溶剂或表面活性剂