第八章原位杂交组织化学.pptVIP

第八章原位杂交组织化学; 研究单一细胞中编码各种蛋白质，多肽的相应mRNA 的定位，从分子水平研究细胞内基因的表达及有关因素的调控。主要用在细胞或组织的基因表达，染色体分析，病毒诊断和发育生物学。 ;一、原位杂交的由来与发展 1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。 自此以后，由于分子生物学技术的迅猛发展，特别是70年代末到80年代初，分子克隆、 质粒和噬菌体DNA的构建成功，核酸自动合成仪的诞生，大大丰富了核酸探针的来源，新的核酸分子杂交类型和方法不断涌现。 ;1969年美国耶鲁大学Gall和Pardue首先用爪蟾核糖体基因探针与其卵母细胞杂交，确定该基因定位于卵母细胞的核仁中。 与此同时， Buongiorno–?Nardelli和Amaldi,?John及其同事等相继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或组织的基因定位，从而创造了原位 杂交细胞或组织化学技术。 1970年 Orth应用3H标记的兔乳头状瘤病毒cRNA探针与兔乳头状瘤组织的冰冻切片进行杂交，首次用原位杂交检测了病毒 DNA在细胞中的定位。; 按其作用方式大致分为液相杂交和固相杂交两种： 液相杂交： ~ 参加反应的两条