12基因工程的原理和技术75.pptxVIP

第二节 基因工程的原理和技术;基因工程的原理： 基因重组 基因工程的目标： 让人们感兴趣的基因在宿主细胞中稳定和高效表达。;基因工程的基本操作步骤：;步骤1：获得目的基因;获得目的基因的方法：;1）人工合成;2）聚合酶链式反应即PCR技术;氢键断裂，形成单链DNA。;基因文库：用重组DNA技术将某种生物细胞的总DNA或染色体DNA的所有片断随机地连接到基因载体上，然后转移到适当的宿主细胞中，通过细胞增殖而构成各个片段的无性繁殖系(克隆)，在制备的克隆数目多到可以把某种生物的全部基因都包含在内的情况下，这一组克隆的总体就被称为某种生物的基因文库。同一定义也适用于某种生物的线粒体DNA或叶绿体DNA的基因文库。 　;3）从基因文库中获取目的基因：;;;步骤2、重组DNA分子的形成：;GAATTCCGTAGAATTCGGATT ;思考： 目的基因、运载体质粒经DNA连接酶处理，可能有几种产物？;(08海南) 图为某种质粒表达载体 简图，小箭头所指分别为限制性 内切酶EcoRI、BamHI的酶切位 点，ampR为青霉素抗性基因， tctR为四环素抗性基因，P为启 动因子，T为终止子，ori为复制 原点。已知目的基因的两端分别 有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。 （1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有 三种。;（2）用上述3种连接产物与 无任何抗药性的原核宿主细胞 接种到含四环的培养基中，能 生长的原核宿主细胞所含有的 连接产物是 （4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶时 。;（1）常用的受体细胞：;;1.将目的基因导入植物细胞;①直接导入法：电击、显微注射、直接吸收、基因枪等方法。 （1）电击法：借助电击仪高压脉冲把目的基因打入宿主细胞。 （2）显微注射法：利用微量注射器在显微镜下直接把目的基因注入宿主细胞。 （3）直接吸收法：把目的基因和宿主细胞混在一起，让其吸收。 （4）基因枪法：在金属微粒上涂一层目的基因，然后发射到宿主细??中。 ②间接导入法：常用的载体是质粒、λ噬菌体。 （1）质粒是细菌染色体DNA以外的环状双链DNA分子，它能自我复制，也可整合到细胞染色体DNA中与其一起表达。质粒通常还含有标记基因，这可以从细胞的表型特征来识别。 （2）λ噬菌体是一种细菌病毒，其环状双链DNA可以作为目的基因的载体。;采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的做法正确的是：( ) ①将毒素蛋白注射到棉受精卵中 ②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中 ③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养 ④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵 A.①② B.②③ C .③④ D.④①;;;步骤5、目的基因的表达;;;思考：;载体质粒;1 用基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质。下列叙述不正确的是 A．常用相同的限制性内切酶处理的基因 和质粒 B．DNA连接酶和 RNA聚合酶是构建重组质粒必需的工具酶 C．可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒 D．导入大肠杆菌的目的基因不一定能 成功表达 ;练习;; 如下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图（ ）;;;9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。8月-218月-21Wednesday, August 25, 2021 10、人的志向通常和他们的能力成正比例。17:21:2417:21:2417:218/25/2021 5:21:24 PM 11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。8月-2117:21:2417:21Aug-2125-Aug-21 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。17:21:2417:21:2417:21Wednesday, August 25, 2021 13、志不立，天下无可成之事。8月-218月-2117:21:2417:21:24August 25, 2021 14、Thank you very much for taking me with you on that splendid outing to London. It was the first time