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蛋白质免疫印迹技术 一、免疫学 研究抗原物质的结构和功能； 免疫应答产物的结构和功能； 抗原刺激机体产生免疫应答的规律。 免疫学的研究范围很广，与很多相关学科交织在一起，并且发展成了很多学科，如免疫生物学、免疫遗传学、血液免疫学、肿瘤免疫学等。 随着免疫生物学的发展，人们发现在高等动物体内存在着具有免疫功能的组织结构（即免疫系统）。 淋巴组织 免疫活性细胞 免疫活性介质 免疫系统功能的生理和病理表现 功能名称 生理功能 病理表现 免疫防御 清除病原微生物及其它抗原性异物 超敏反应（强） 免疫缺陷病（弱） 免疫自稳 清除损伤或衰老细胞 自身免疫性疾病 免疫监视 清除突变或畸变细胞 防止肿瘤发生 肿瘤或病毒持续性 杀伤病毒感染细胞 感染 当外源异体物质，如细菌、病毒、蛋白质、多糖等进入动物机体后，可以激活机体免疫系统，产生对外源物质的排除作用，从而保护机体免受外源物质的侵害。 机体的这一特异免疫应答功能的细胞基础是淋巴细胞。 免疫应答的类型 （一）固有性免疫应答（innate immune response) 又称先天性免疫应答，非特异性免疫应答：是机体在种系发育和进化过程中形成的免疫防御功能。 （二）适应性免疫应答（adaptive immune response） 又称获得性免疫应答，特异性免疫应答，是机体出生后通过与抗原物质接触后所产生的一系列防御功能。（具有特异性、多样性、记忆性、耐受性、自限性） 抗原和免疫原性 抗原（antigens，Ag）是指能够刺激机体免疫活性细胞产生抗体或致敏淋巴细胞，并在体内或体外发生特异性反应的物质。 常见的抗原有蛋白质、多糖、磷脂、脂多糖、结合蛋白质、核酸、激素等有机物。 抗原具有两方面的特性：免疫原性（immunogenicity）和免疫反应性（immunoreactivity）。 免疫原性（immunogenicity）是指抗原刺激机体引起免疫应答的能力。 免疫反应性（immunoreactivity）是指抗原与相应免疫应答产物(即抗体)在体内或体外发生特异性结合反应的能力。 抗原的分类 抗原可以分为完全抗原和半抗原。 完全抗原：具有免疫原性和免疫反应性的抗原称为完全抗原（complete antigen） 半抗原：只具有免疫反应性而无免疫原性的抗原称为半抗原（hapten），也称为不完全抗原(incomplete antigen)。与蛋白质结合后成为完全抗原。半抗原能与相应的抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合反应。绝大多数多糖和所有类脂都属于半抗原。 抗体的种类 抗体（antibodies，Ab)是专门对抗抗原特异结构的球蛋白，故也称为免疫球蛋白（immunoglobulins, Ig)。存在于血清、体液中，是构成机体免疫作用的主要物质。 免疫球蛋白依据其理化性质及生化性质的不同，分为五种类型： IgG、 IgA、 IgM、 IgD和IgE。 人体血清中IgG含量最多， IgA次之， IgM较少， IgD和IgE微量。 抗原抗体反应（antigen-antibody reaction） 是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。可发生于体内（in vivo），也可发生于体外（in vitro）。 体内反应可介导吞噬、溶菌、杀菌、中和毒素等作用； 体外反应：可出现凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应及中和反应等各种不同的反应类型。 因抗体主要存在于血清中，在抗原或抗体的检测中多采用血清作试验，所以体外抗原抗体反应亦称为血清学反应（serologic reaction）。 二、印迹法（blotting） 印迹法是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段的方法，称为Southern 印迹法。 人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分