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西部地区膜片钳培训暨技术研讨会 在体膜片钳技术介绍及应用 周艺 第三军医大学基础部 神经生物学教研室 023 在体膜片钳发展（1 ） • 产生：1990年前后 – 松散膜片钳及全细胞电流钳记录 免疫组化 解剖定位或 玻璃电极 功能定位 皮层 皮层 * 电极内液可添加生物胞素/药物 去极化 松散膜片钳 全细胞电流钳 超极化 单细胞胞外记录 单细胞胞内记录+可控电流注入 在体膜片钳发展（2 ） • 成熟：全细胞电压钳记录（2003年前后） 当细胞膜电位钳制在0 mV ，即谷氨酸，乙 酰胆碱等受体等门控的阳离子通道（Na+ ， K+ 等）的反转电位时，系统记录到的就是 V =0 mV hold 不包含兴奋性输入的纯抑制性电流。 当细胞膜电位钳制在-70mV ，即GABA或 V =-70 mV hold Glycine受体门控的氯离子通道的反转电位 时，系统记录到的就是不包抑制性输入的纯 兴奋性电流。 以感觉系统上行通路为例 外周感受器 突触前 自然刺激 声、光等 突触后 同一个细胞中 在体全细胞电压钳 在体胞外记录 突触输入 动作电位 即神经元接受的输入 即神经元的输出 在体膜片钳发展（3 ） • 发展： – 双光子成像技术（从盲法到靶向） 盲法 免疫组化 靶向 实时荧光 优点：可视化，实验成功率较高，形态清晰 问题：操作较复杂（膜片钳+双光子），光毒性，设备成