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实验八 蛋白质的表达、分离、纯化和鉴定 ; 实验原理
克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理，同时克隆基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的研究。大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统，其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统，表达的目的蛋白量甚至能超过细菌总蛋白量的80%。; 本实验中，携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。
; 材料与试剂;;;;;4. 灌完浓缩胶，插入梳子。等到浓缩胶自然凝聚后，将装置放入电泳槽内,加入电泳缓冲液,小心地拔出梳子，如果拔出梳子后加样孔之间的间隔发生扭曲，可以用注射器针头小心地加以整理。
;5．加样：取大肠杆菌和BSA蛋白样品加样，每个加样孔加样不宜过多，一般每孔加样10?L。
6．电泳：先恒压80V，待样品进入分离胶后，调电压为120V（恒压）。当溴酚蓝移动到离底部约0.5cm时，停止电泳。;;注意事项
(1) Acr和Bis均为神经毒剂，对皮肤有刺激作用，操作时应戴手套和口罩。
(2) 玻璃板表面应光滑洁净，否则在电泳时会造成凝胶板与玻璃板之间产生气泡。
(3) 样品槽模板梳齿应平整光滑。
(4) 灌凝胶时不能有气泡，以免影响电泳时电流的通过。
(5) 切勿破坏加样凹槽底部的平整，以免电泳后区带扭曲。
（6）电泳时应选用合适的电流、电压，过高或者过低都会影响电泳效果。
(7) 稀释5×SDS/电泳缓冲液至1×浓度灌入电泳槽，需800毫升。;1.将红色玻璃夹子底座朝下、卡口打开呈直角状，放入厚薄两片玻璃，薄玻璃朝向自己。注意厚玻璃箭头向上，旁边两条小玻璃条与薄玻璃接触，使之形成一个间隙。;3.将做好的玻璃夹放在制胶架上，注意薄玻璃朝向自己，厚玻璃上的箭头向上。按弹簧夹，将玻璃夹卡入制胶架。在玻璃的间隙内灌胶，放上梳子，待胶凝固。 ;5.将底座的开关打开，并向外拨动透明的架子，使中间空隙增大，放入电极架。 ;7.关上底座开关。 ;9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。***
10、低头要有勇气，抬头要有低气。****
11、人总是珍惜为得到。*****
12、人乱于心，不宽余请。****
13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。*****
14、抱最大的希望，作最大的努力。****
15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。*****
16、业余生活要有意义，不要越轨。***
17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。****
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