MALDITOFMS在细菌检测中的应用（教学课件）.pptVIP

MALDI-TOF-MS在细菌检测中的应用;2021/8/23;一、现有的细菌检测方法及其缺陷;现有的细菌检测方法及其缺陷;现有的细菌检测方法及其缺陷;现有的细菌检测方法及其缺陷;;二、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱;（一）质谱的基本概念;质谱的基本概念;原理： 使样品中各组分电离生成不同质荷比的离子，经加速电场的作用，形成离子束，进入质量分析器。 利用电场和磁场使其发生相反的速度色散，离子束中： 速度慢的离子通过电场后偏转大，速度快的偏转小 速度慢的离子在磁场中偏转较大，??度快的偏转小 在磁场中还能发生质量的分离，使不同质荷比的离子聚焦在不同的点上，将它们分别聚焦而得到质谱图，从而确定其质量。;仪器： 利用运动离子在电场和磁场中偏转原理设计的仪器称为质谱计或质谱仪。 质谱计指用电子学方法检测离子，而质谱仪指离子被聚焦在照相底板上进行检测。 质谱法的仪器种类较多。 有单聚焦质谱计、双聚焦质谱计和四极矩质谱计等。 后两种用得较多，而且多与气相色谱仪和电子计算机联用。;高真空系统： 质谱计必须在高真空下才能工作。 高真空的阀泵系统一般由前级泵 （常用机械泵）和油扩散泵或分子涡轮泵等组成。 扩散泵能使离子源保持在10-6 ～ 10-7毫米汞柱的真空度。 在分析器中还有一只扩散泵，能维持10-7 ～ 10-8毫米汞柱的真空度。;样品注入系统： 可分直接注入、气相色谱、液相色谱、气体扩散四种方法。 固体样品通过直接进样杆将样品注入，加热使固体样品转为气体分子。 对不纯的样品可经气相或液相色谱预先分离后，通过接口引入。 液相色谱/质谱接口有传动带接口、直接液体接口和热喷雾接口。;离子源： 使样品电离产生带电粒子（离子）束的装置。 应用最广的电离方法是电子轰击法（EI）。 还有化学电离（CI）、光致电离、场致电离、激光电离、火花电离、表面电离、X 射线电离、场解吸电离（desorption ionization）和快原子轰击电离等。 其中场解吸和快原子轰击特别适合测定挥发性小和对热不稳定的化合物。;质量分析器： 将离子源中形成的离子束按质荷比的大小进行分离的装置。 它的结构有单聚焦、双聚焦、四极矩、飞行时间（Time of Flight, TOF）和摆线等。;收集器： 经过分析器分离的同质量离子可用照相底板、法拉第筒或电子倍增器收集检测。 质谱仪的分辨率和灵敏度等性能非常高，只需要ug甚至ng级的样???，就能得到一张满意的质谱图。 对于微量不纯的化合物，可以利用气相色谱或液相色谱（对极性大的化合物）将化合物分离成单一组分，导入质谱计，录下质谱图。;应用： 由于色谱仪－质谱计联用后给出的信息量大，该法与计算机联用，使质谱图的规格化、背景或柱流失峰的舍弃、元素组成的给出、数据的储存和计算、多次扫描数据的累加、未知化合物质谱图的库检索，以及打印数据和出图等工作均可由计算机执行，大大简化了操作手续。 质谱法特别是它与色谱仪及计算机联用的方法，已广泛应用在有机化学、生化、药物代谢、临床、毒物学、农药测定、环境保护、石油化学、地球化学、食品化学、植物化学、宇宙化学和国防化学等领域。;质谱仪： 质谱仪种类繁多，不同仪器应用特点也不同。 在300℃左右能汽化的样品，可以优先考虑用GC-MS进行分析，因为GC-MS使用电子轰击法电离源（EI源），得到的质谱信息多，可以进行库检索。 在300 ℃左右不能汽化，需要用LC-MS分析，此时主要得到分子量信息，如果是串联质谱，还可以得一些结构信息。 如果是生物大分子，主要利用LC-MS和MALDI-TOF分析，主要获得分子量信息。对于蛋白质样品，还可以测定氨基酸序列。;质谱仪： 质谱仪的分辨率是一项重要技术指标，高分辨质谱仪可以提供化合物组成式，这对于结构测定是非常重要的。 双聚焦质谱仪，傅立叶变换质谱仪，带反射器的飞行时间质谱仪等都具有高分辨功能。 ;质谱的基本概念—质谱仪;（二）基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱;1. 什么是MALDI-TOF-MS 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-Of-Flight Mass Spectrometry） 最近发展起来的一种质谱技术，能够提供各具特征的微生物蛋白质质量指纹图谱，通过检索特征性质质谱峰数据库或与已知微生物的质谱峰比较，来实现对微生物的快速鉴定 具有快速、高灵敏度、高分辨率等优点，能够对核酸、蛋白质和多肽等生物大分子进行微量分析.;2. 主要概念 MALDI（Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization） 是一种直接气化并离子化非挥发性生物样品的质谱离子化方式。 将被分析物的溶液和某种基质溶液混合，蒸发溶剂