教学课件：《蛋白质工程》井健.ppt

二、基因融合和基因剪接 1．利用基因融合技术表达外源基因的缘由 2．基因融合的策略与蛋白质分子嵌合体 3．蛋白质内含子介导的蛋白质分子间的连接 基因融合的用途 上述这些基因融合策略，主要是有利于外源基因的表达、表达产物的分离、纯化以及细胞定位。作为蛋白质分子改造可以借用这些策略对蛋白质分子中的特定序列、结构元件乃至结构域通过基因剪接来进行操作。 第三节 重组蛋白质的表达 重组蛋白质在大肠杆菌中的表达 重组蛋白质在酵母细胞中的表达 重组蛋白质在哺乳类动物细胞中的表达 一、大肠杆菌中表达体系的优点 大肠杆菌(E.coli)表达体系是目前应用最广的一个外源基因表达体系，是外源基因表达的首选体系。 利用大肠杆菌作为表达体系的优点：遗传学和生理学背景清楚；容易培养，特别是高密度发酵；外源基因经常可以达到高效表达。 大肠杆菌表达体系的缺点 大肠杆菌系统最大的不足之处是不能进行典型真核细胞所具有的复杂的翻译后修饰，如糖基化、烷基化、磷酸化、特异性的蛋白水解加工等；而广泛二硫键的形成以及外源蛋白质组装成多亚基复合体的能力也受到限制。 大肠杆菌体系的另一个不足之处是外源基因产物在大肠杆菌细胞内易形成不溶性的包涵体；而当真核基因在大肠杆菌中表达时，作为起始氨基酸，甲硫氨酸常依然保留在蛋白质的N末端。最后，由于真核mRNA的结构特性以及密码子使用频率与大肠杆菌本身的差异