核酸的物化性质.pptxVIP

核酸的物化性质;一、核酸的水解;（二）核酸的碱解;第3页/共49页;（三）核酸的酶解;牛脾核糖核酸酶的作用位点; 链球菌脱氧核糖核酸酶，是一个内切酶，作用于 DNA产 物为5′-磷酸为末端的碎片，其长度不一。 限制性内切酶，在细菌中发现有这类酶，主要是降解外 源的DNA。具有很严格的碱基序列专一性，是基因工程最 重要的工具酶。;第7页/共49页;第8页/共49页;三、核酸的紫外吸收;有时核酸溶液的紫外吸收以摩尔磷的吸光度来表示，摩尔磷即相当于摩尔核苷酸。据此先测定核酸溶液中的磷含量及紫外吸收值，然后求出摩尔磷吸光系数ε（P）。;四．核酸的变性、复性与杂交;A260值增加 粘度下降 浮力密度增大 分子量不变 ;DNA的热变性和解链温度（Tm）;;（2）G-C的含量。 G-C的含量高，Tm值高。因而测定Tm值，可反映DNA分子中G、C含量，可通过经验公式计算： （G+C)%=(Tm-69.3)?2.44;（3）介质中的离子强度。Tm与介质中离子强度有关，一般来说，在离子强度低的介质中，DNA的Tm值较低，熔解的范围较宽。在离子强度高的介质中，DNA的Tm值较高，熔解的范围较窄。 DNA的保存应在含盐的缓冲液中;RNA的变性;（二）核酸的复性;DNA复性;（三）核酸的杂交（hybridization）;第21页/共49页;第22页/共49页;第23页/共49页;第24页/共49页;Southern blotting(Southern 印迹) Northern blotting(Northern 印迹) Western blotting(Western 印迹) ;第15章 核酸的研究方法;2、用氯仿-辛醇（或异戊醇）代替苯酚，方法同1;（二）;（三）;第30页/共49页;第31页/共49页;第32页/共49页;第33页/共49页;第34页/共49页;第35页/共49页;第36页/共49页;第37页/共49页;第38页/共49页;第39页/共49页;第40页/共49页;（三）核酸的酶解;牛脾核糖核酸酶的作用位点; 链球菌脱氧核糖核酸酶，是一个内切酶，作用于 DNA产 物为5′-磷酸为末端的碎片，其长度不一。 限制性内切酶，在细菌中发现有这类酶，主要是降解外 源的DNA。具有很严格的碱基序列专一性，是基因工程最 重要的工具酶。;三、核酸的紫外吸收;DNA复性;第46页/共49页;第47页/共49页;第48页/共49页