细胞生物学实验步骤.docxVIP

冻存细胞的复苏 1、于液氮罐中取出冻存管。 2、 37 C水浴锅中摇动，使之快速融化。 3、 超净台内酒精棉球擦拭，打开冻存管，吸出细胞悬液，注入离心管中，再滴 加 2 倍培养液，混匀。 4、 离心：1500转/分， 3分钟，弃上清。 5、 吸取2-3ml培养液加入到离心管中，吹打制悬，接种到培养瓶中， 37C培养。 组织块法培养骨骼肌细胞 1、 将新生大鼠处死，再用酒精棉球擦拭其全身消毒，带入超净台内于肩关节和 髋关节处剪取四肢（去爪） ，置培养皿中。 2、 PBS液中，清理血污，剥去皮肤。 3、 用PBS液洗涤两次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。 4、 用将肌组织从骨骼上剪切下来，PBS液清洗后转移至干净培养皿中。 5、 加少量培养液，将组织剪成1mm3b块，用吸管将其转移到培养瓶，贴附与瓶 底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。入 37 C培养 箱静置 0.5-1 小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起） ， 37 C继续培养。 贴壁细胞的传代和冻存 1 、超净台中打开细胞培养瓶，用吸管将培养液吸出。 2、 加入PBS液 ,使其覆盖培养瓶底部，轻轻摇动后倒掉 。 3、 加入消化液，以覆盖整个培养瓶底部，盖好瓶盖，于倒置显微镜下观察，待 见到细胞质回缩、细胞间隙增大后于超净台内倒掉消化液。 4、 加培养液终止消化。 5、 用吸管吸取培养瓶