双向电泳的技术流程和样品制备.pptxVIP

双向电泳的技术流程和样品制备;基因组学与蛋白质组学;Applications of proteomics;蛋白质组分析的首要要求;生物学问题的提出;蛋白质组研究的基本技术路线;双向电泳分析中的样品制备;可溶性样品 ;样品的溶解;增加样品溶解性的手段;起载体作用的两性电解质：即便在变性剂和表面活性剂存在的情况下，某些蛋白质也需要在盐离子的作用下才能保持其处于溶解状态，否则这些蛋白质在其处于PI点时会发生沉淀。 Carrier ampholytes的作用在于捕获样品中的少量盐分，从而保证蛋白质的溶解性。应用时，两??电解质的浓度应小于0.2％（w/v)。浓度过高会使IEF的速度降低。另外，为了保证实验的精确性，在选择不同pH范围的IPG胶条时，也应使两性电解质的pH值与之相符合。;样品液的准备; IPG pH Range;Reagent;Reagent;样品中核酸的去除;亚蛋白质组样品的制备;特殊样品的制备;强碱性蛋白质（如核糖体 ）的处理：先将蛋白预处理以富集，再用特殊pH梯度的IPG胶条（如pH3－12、4-12或10-12）进行等电聚焦。其中窄范围碱性IPG胶（如pH10-12）的挑战是克服反向、阴极向阳极、电渗流和水平条纹模式，而宽范围的碱性IPG胶（如pH3-12、4-12）等消除了窄范围胶所需要的专门水化液。 极端分子量的蛋白质：小于8kD和大于200kD的蛋白在常规I