微生物分类学之沙门氏菌检验.pptxVIP

本资料来源;沙门氏菌及其检验; 根据侵入机体沙门氏菌菌种的不同，在临床上引起四种不同的疾病: （1）伤寒、副伤寒 由沙门氏属中的伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。 （2）食物中毒 沙门氏菌属引起的食物中毒，主要以肠炎杆菌、鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌和汤普逊杆菌等最为多见。临床症状主要是胃肠炎。病程较短，一般2~4d, 可完全恢复。 （3）败血症 多为猪霍乱杆菌引起，甲、乙、丙型副伤寒杆菌和肠炎杆菌亦可引起败血症。 （4）慢性肠炎 沙门氏杆菌可引起慢性、持久性肠炎。;;二、沙门氏菌的生物学特性 1、形态与染色特性：革兰氏阴性短杆菌，无芽孢,一般无荚膜，周生鞭毛（除鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌外），大多数具有菌毛。 2、培养特性：需氧或兼性厌氧；普通营养琼脂上生长良好，菌落中等大小，无色半透明、圆形、光滑、湿润。;3、生化特性： 大部分发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇和山梨酸产气； 一般不发酵乳糖和蔗糖，不发酵侧金盏花醇； 一般不产吲哚，V-P反应阴性； 不分解尿素，苯丙氨酸不脱氨； 三糖铁琼脂斜面常产生H2S。 4、抵抗力：较弱，不耐热，最适温度37℃，最适pH6.8-7.8。 5、毒素特征：不产外毒素，产毒性很强的内毒素，这是致病的主要原因。 ;6、血清学特性： 沙门氏菌具有复杂的抗原结构。虽然沙门氏菌具有O、H、K和其它表面物质(如菌毛)四种抗原，但只有O抗原是每个菌株均有的成分。 1）O抗原（菌体抗原） *存在于菌体表面，为脂多糖，多糖部分决定其特异性， *O抗原耐热(100℃、2.5h或121℃、2h加热均不破坏其抗原性)，其特异性不易丧失或变异。 *一个菌体具有一种或多种不同的O抗原。;2）H抗原（鞭毛抗原） *H抗原存在于鞭毛中，不耐热，化学成分蛋白质，其抗原性可以被酒精所破坏。 *H抗原可分为两相 第1相：为特异相，用小写英文字母表示，a～z，Z以后则从z1、z2……，已编到z83。 第2相：为非特异相以阿拉伯数字表示，共7种。 具有第1相和第2相H抗原的细菌称为双相菌，大多数沙门氏菌属于此； 仅有一相者称单相菌，如肠炎沙门氏菌。 极少数无鞭毛菌两相抗原都不具有，称为无相菌，如鸡白痢沙门氏菌。 ;3） Vi抗原（包膜抗原） 少数菌沙门氏菌中尚有一种表面包膜抗原，功能与大肠杆菌的K抗原类同，因一般认为它与毒力(Virulence)有关，故称Vi抗原。 经过几次传代、60℃热处理或石炭酸处理后容易消失。 ;三、 生化反应;1、吲哚试验( indol test) 细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。 色氨酸→ 吲哚（无色）＋对二甲基氨基苯甲醛→ 玫瑰吲哚（红色，+ 大肠杆菌） 不产吲哚（无色，- 产气杆菌） 试验方法：取培养24h培养液，先加入少量乙醚，摇动试管以提取和浓缩吲哚，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入吲哚试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。 应用：用于肠道杆菌的鉴定;Indol test 吲哚试验 tryptophan色氨酸→indole吲哚→玫瑰吲哚 ↑ Kovacs reagent吲哚试剂 （对二甲基氨基苯甲醛）;2、尿素酶（Urease，脲酶）试验 有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。 酚红： 黄色→ 红色（+ 普通变形杆菌） 黄色（- 大肠杆菌） 试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇匀，于36±1℃培养，观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。培养24h左右，观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。; Urease Test 尿素酶试验：;3、氨基酸脱羧酶的测定;;4、三糖铁（TSI）琼脂试验;; 5、β-半乳糖苷酶（ONPG）的测定;四、检测方法; 从食品中分离和鉴定沙门氏菌，当前通常采用的方法共分5个步骤： 前增菌：食品样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。加工食品均应经过前增菌。 （选择性）增菌：此培养基允许沙门氏菌持续增菌，同时阻止大多数其他细菌的增殖。未经加工的食品不必经过前增菌而直接增菌。 选择性平板分离：采用固体选择培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。 生物化学筛选：排除大多数