微生物的实验室培养.pptxVIP

课题1 微生物的实验室培养;;一、基础知识：;培养基的种类;标准;固体培养基：菌落;液体培养基：;半固体培养基：;选择培养基;大肠杆菌呈 黑色中心 ,有金属光泽;2、培养基配制原则：;3、培养基的营养构成;碳源、氮源、生长因子的比较;（二）无菌技术;（１）消毒定义： 　　指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。（不包括芽孢和孢子）; 比较项;1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、???洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ……;1、灼烧灭菌 接种环、接种针、试管口 2、干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min.; 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。 培养微生物的培养皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 ;1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？;3.微生物实验室培养的基本操作程序;三、实验操作;1．计算、称量 2．溶化 3．调pH：　pH7．6　 4．过滤：这一步可以省去。 5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 6．加塞 7．包扎; 8．灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。 9．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. 10．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。;倒平板技术; 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基??温度？;3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？;（二）、纯化大肠杆菌;菌落：;菌落;霉菌的菌落特征 因种而异;接种环;问题讨论; 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;涂布器;问题讨论;微生物的恒温培养;3．1　培养未接种培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。 3．2　在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。 3．3　培养12h和24h后的菌落大小不同（相同、不同）；菌落分布位置相同（相同、不同）。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。 3．4在某培养基上出现了3种特征不同的菌落，原因有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。 ;四、课题成果评价 ;菌种的保存;本课题知识小结:;【典例解析】;例2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前;编号;（3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养 。 （4）表中营养成分共有 类。 （5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是 。 （6）右表中各成分重量确定的原则是 。 （7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。