重组SARS-CoV-2 N蛋白及其制备方法、应用、及动物用新型冠状病毒ELISA抗体检测试剂盒发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 113185584 A (43)申请公布日 2021.07.30 (21)申请号 202110437953.4 C07K 16/10 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01) (22)申请日 2021.04.22 (71)申请人 河南中泽生物工程有限公司 地址 450000 河南省郑州市航空港区迎宾 路南侧4号楼1-2层 (72)发明人 王爱萍　栗宁　张改平　邬成业　 刘红亮　陈玉梅　丁培阳　田媛媛　 冯景　 (74)专利代理机构 郑州睿信知识产权代理有限 公司 41119 代理人 牛爱周 (51)Int.Cl. C07K 14/165 (2006.01) C12N 15/50 (2006.01) C12N 15/866 (2006.01) 权利要求书1页 说明书7页 序列表3页 附图2页 (54)发明名称 重组SARS-CoV-2 N蛋白及其制备方法、应 用、及动物用新型冠状病毒ELISA抗体检测试剂 盒 (57)摘要 本发明涉及重组SARS‑CoV‑2N蛋白及其制备 方法、应用、及动物用新型冠状病毒ELISA抗体检 测试剂盒。本发明提供了重组SARS‑CoV‑2N蛋白 的制备方法，将经过密码子优化的编码SARS‑ CoV‑2N蛋白的核苷酸序列构建入昆虫‑杆状病毒 Bac‑to‑Bac表达系统的载体中，并转染昆虫细 胞，实现病毒N蛋白的真核表达；亲和层析法提取 并纯化昆虫细胞中表达的N蛋白。经过条件优化 后每升感染重组杆状病毒的昆虫细胞中重组蛋 白含量可达到200mg以上。本发明还提供了动物 A 用新型冠状病毒ELISA抗体检测试剂盒，该试剂 4 盒以优化后的SARS‑CoV‑2N蛋白作为包被抗原， 8 5 5 能够对小鼠、水貂、家猫、狗等动物的新冠病毒感 8 1 3 染后的血清抗体进行特异性检测，在间接ELISA 1 1 N 检测中表现出良好的准确性。 C CN 113185584 A 权　利　要　求　书 1/1 页 1.重组SARS‑CoV‑2N蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 2.根据权利要求1所述的重组SARS‑CoV‑2N蛋白，其特征在于，其编码基因的核苷酸序 列如SEQ  ID NO:2所示。 3.包含权利要求2所述的重组SARS‑CoV‑2N蛋白编码基因的表达盒、重组载体、重组细 胞或重组菌。 4.如权利要求1所述的重组SARS‑CoV‑2N蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 将如权利要求2所述的重组SARS‑CoV‑2N蛋白的编码基因导入昆虫‑杆状病毒Bac‑to‑Bac表 达系统的载体中，并转染昆虫细胞，实现病毒N蛋白的真核表达；并用亲和层析法提取并纯 化昆虫细胞中表达的N蛋白。 5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述载体为pFastBacI、pFastBacDual、 pFastBacHTA、pFastBacHTB中任一种。 6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述昆虫细胞为sf9、sf21、High Five中任 一种。 7.如权利要求1所述的重组SARS‑CoV‑2N蛋白在制备动物用新型冠状病毒抗体检测试 剂盒中的应用。 8.动物用新型冠状病