一种RCA-纳米磁珠复合物及其制备与应用发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 113174426 A (43)申请公布日 2021.07.27 (21)申请号 202110468570.3 (22)申请日 2021.04.28 (71)申请人 华中科技大学 地址 430074 湖北省武汉市洪山区珞喻路 1037号 (72)发明人 吴钰周　林子桉　刘瑾　 (74)专利代理机构 华中科技大学专利中心 42201 代理人 许恒恒 (51)Int.Cl. C12Q 1/6806 (2018.01) C12Q 1/70 (2006.01) C12R 1/93 (2006.01) 权利要求书2页 说明书7页 序列表3页 附图3页 (54)发明名称 一种RCA-纳米磁珠复合物及其制备与应用 (57)摘要 本发明属于分子生物学领域，公开了一种 RCA‑纳米磁珠复合物及其制备与应用，该复合物 是由磁珠与RCA探针结合而成，其中，磁珠包被链 霉亲和素，RCA探针是以新型冠状病毒基因为模 板设计的；新型冠状病毒基因其核苷酸序列的长 度至少为50nt，是取自如序列SEQ  ID NO.1所示 的新型冠状病毒基因组中的连续片段。本发明通 过以新型冠状病毒基因为模板设计RCA探针，并 将磁珠与RCA探针结合得到RCA‑纳米磁珠复合 物，可以明显提高较低浓度含有新型冠状病毒的 样本的检测限(检测效率提高100倍)，且具备准 确性高、灵敏度高、操作简便和特异性强等特点。 A 6 2 4 4 7 1 3 1 1 N C CN 113174426 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种RCA‑纳米磁珠复合物，其特征在于，该复合物是由磁珠与RCA探针结合而成，其 中，所述磁珠包被链霉亲和素，所述RCA探针是以新型冠状病毒基因为模板设计的；所述新 型冠状病毒基因其核苷酸序列的长度至少为50nt，是取自如序列SEQ  ID NO.1所示的新型 冠状病毒基因组中的连续片段。 2.如权利要求1所述RCA‑纳米磁珠复合物，其特征在于，所述磁珠是以磁珠缓冲液悬浊 液的形式存在的，磁珠自身的粒径为100nm‑1μm。 3.如权利要求1或2所述RCA‑纳米磁珠复合物的制备方法，其特征在于，包括(I)生物素 修饰核酸结合磁珠的制备步骤，和(II)滚环扩增产物(RCA)与磁珠结合形成RCA‑纳米磁珠 复合物的步骤，其中， (I)生物素修饰核酸结合磁珠的制备步骤，具体包括以下子步骤： S1：将装有包被链霉亲和素的磁珠溶液置于漩涡振荡器中震荡以重悬磁珠，用移液枪 将处理后的磁珠悬浊液转移到新的离心管中，置于磁性分离架上静置1‑10分钟，弃去上清， 加入1×binding buffer缓冲液洗涤磁珠后以1×binding buffer缓冲液重悬，即为磁珠缓 冲液悬液； 其中，所述重悬所使用的1×binding buffer缓冲液的体积与磁珠自身的重量之比满 足1mL：0.1mg‑10mg；所述1×binding buffer缓冲液组成如下：10mM Tris‑HCl,1mM EDTA， 1M NaCl，0.1％Tween‑20；并且，所采用的溶剂为超纯水，所述1×binding buffer缓冲液的 pH值为7.5； S2：将所述磁珠缓冲液悬液置于磁性分离架静置1‑10分钟，弃去上清，加入用1× binding buffer稀释的生物素修饰核酸，所述生物素修饰核酸的核苷酸序列如序列SEQ  ID  NO.2所示，充分震荡重悬磁珠，将离心