一种基于表面增强拉曼散射的超灵敏生物芯片及其制备方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 113092441 A (43)申请公布日 2021.07.09 (21)申请号 202110376871.3 (22)申请日 2021.04.08 (71)申请人 吉林大学 地址 130012 吉林省长春市长春高新技术 产业开发区前进大街2699号 (72)发明人 卢革宇　刘晓敏　张美玲　潘嘉林　 张玲　包浩强　 (74)专利代理机构 长春吉大专利代理有限责任 公司 22201 代理人 刘世纯　王恩远 (51)Int.Cl. G01N 21/65 (2006.01) G01N 33/531 (2006.01) 权利要求书2页 说明书5页 附图3页 (54)发明名称 一种基于表面增强拉曼散射的超灵敏生物 芯片及其制备方法 (57)摘要 一种基于表面增强拉曼散射的SARS‑CoV‑2 超灵敏生物芯片及其制备方法，属于功能材料与 生物传感检测技术领域。是以硅片为衬底组装金 纳米颗粒，修饰新型冠状病毒刺突蛋白抗体 (SARS‑CoV‑2spike antibody)和牛血清白蛋白 得到SERS免疫基底；通过在Ag NPs表面依次修饰 拉曼分子对巯基苯甲酸和SARS‑CoV ‑2spike  antibody，制备SERS免疫探针；然后将SERS免疫 基底吸附不同浓度的新型冠状病毒刺突蛋白抗 原(SARS‑CoV‑2spike antigen protein)和SERS 免疫探针，得到具有三明治免疫夹心结构的基于 A 表面增强拉曼散射的SARS‑CoV‑2超灵敏生物芯 1 片。本发明解决了当前普遍采用静电吸附法制备 4 4 2 的增强基底灵敏度低和均匀性差的问题，达到了 9 0 3 进一步提高SERS检测灵敏度的目的。 1 1 N C CN 113092441 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种基于表面增强拉曼散射的SARS‑CoV‑2超灵敏生物芯片的制备方法，其步骤如 下： (1)将1mL Au NPs溶液用去离子水稀释8～15倍，进行第一次离心，然后将沉淀分散到 1mL聚乙烯吡咯烷酮溶液中，进行第二次离心，再将沉淀分散于1mL乙醇中；随后，在90～150 μL Au NPs的乙醇溶液中加入1～1.2mL二氯甲烷和1.8～2mL去离子水，将得到的混合溶液 剧烈摇晃30～60s；再缓慢加入400～450μL正己烷，此时在液体表面形成了致密的Au NPs单 层膜，用亲水处理后的硅片将Au NPs单层膜捞起；重复上述制备致密的Au NPs单层膜的操 作1次，然后用上述硅片再次将致密的Au NPs单层膜捞起，从而在硅片上组装2层Au NPs单 层膜，从而得到SERS活性基底；将SERS活性基底浸入20～25μM的巯基十一酸乙醇溶液中1.5 ～3.0h，取出后用乙醇溶液冲洗2～4次；然后在SERS活性基底上滴加10～15μL、10～12μg/ mL SARS‑CoV‑2spike antibody的PBS溶液，4℃孵育4～6小时，用PBS和去离子水依次冲洗2 ～4次；最后向上述基底表面滴加10～15μL、质量百分数3～5％的BSA的PBS溶液，4℃孵育 1.5～3.0小时，用PBS和去离子水依次冲洗2～4次，得到SARS‑CoV‑2spike antibody修饰的 SERS免疫基底； (2)将200～300μL、0.1mM 4MBA的乙醇溶液加入到1mL Ag NPs溶液中，27～32℃搅拌8 ～12h，8000～9000rpm离心10～20分钟后分散于1mL PBS中，得到4MBA修饰的Ag NPs溶液， 记为Ag@4MBA溶液；再将30～50μL、10～12