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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 113249522 A
(43)申请公布日 2021.08.13
(21)申请号 202110653776.3
(22)申请日 2021.06.11
(71)申请人 中国科学院微生物研究所
地址 100101 北京市朝阳区北辰西路1号院
3号
(72)发明人 杨利敏 刘文军
(74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限
公司 11245
代理人 何叶喧
(51)Int.Cl.
C12Q 1/70 (2006.01)
C12Q 1/6858 (2018.01)
C12N 15/11 (2006.01)
权利要求书2页 说明书10页
序列表2页 附图3页
(54)发明名称
一种检测SARS-CoV-2变异毒株核酸的方法
及其应用
(57)摘要
本发明公开了一种检测SARS‑CoV‑2变异毒
株核酸的方法及其应用。发明人发现,当核苷酸G
与核苷酸C互补结合后,鸟嘌呤的淬灭能力显著
降低,利用这一发现设计了一种可鉴定单碱基差
异的自淬灭探针,从而突破了荧光PCR技术难以
实现单碱基鉴别的技术瓶颈。本发明提供的用于
检测核酸分子中的核苷酸突变的探针,是基于所
述核苷酸突变设计的,其中具有对应于所述核苷
酸突变的核苷酸G,将其命名为目标G;所述探针
标记有荧光染料,且所述荧光染料标记在目标G
的相邻核苷酸上。进一步,本发明可以实现对新
A 冠病毒变异毒株的单碱基快速鉴定,对于新型冠
2 状病毒肺炎的变异株快速鉴别及疫情防控具有
2
5
9 重大价值。
4
2
3
1
1
N
C
CN 113249522 A 权 利 要 求 书 1/2页
1.一种用于检测核酸分子中的核苷酸突变的探针,为探针甲或探针乙;
对于所述探针甲来说,所述核苷酸突变为涉及核苷酸G的突变,即突变前为核苷酸G或
突变后为核苷酸G;所述探针为正向杂交探针,是基于所述核苷酸突变设计的,其中具有对
应于所述核苷酸突变的核苷酸G,将其命名为目标G;所述探针标记有荧光染料,且所述荧光
染料标记在目标G的相邻核苷酸上;
对于所述探针乙来说,所述核苷酸突变为涉及核苷酸C的突变,即突变前为核苷酸C或
突变后为核苷酸C;所述探针为反向杂交探针,是基于所述核苷酸突变设计的,其中具有对
应于所述核苷酸突变的核苷酸G,将其命名为目标G;所述探针标记有荧光染料,且所述荧光
染料标记在目标G的相邻核苷酸上。
2.一种用于检测核酸分子中的核苷酸突变的引物探针组,包括权利要求1所述探针和
特异引物对;所述特异引物对的靶序列包括所述探针对应的序列。
3.一种用于鉴定核酸分子中的核苷酸突变的荧光PCR方法,包括如下步骤:以供试DNA
为模板,采用权利要求2所述引物探针组进行PCR扩增;根据扩增曲线鉴定核酸分子中的核
苷酸突变。
4.一种用于鉴定核酸分子中的核苷酸突变的荧光PCR方法,包括如下步骤:以供试RNA
为模板,采用权利要求2所述引物探针组在含有反转录酶的体系中进行PCR扩增;根据扩增
曲线鉴定核酸分子中的核苷酸突变。
5.权利要求1所述探针或权利要求2所述引物探针组在制备试剂盒中的应用;所述试剂
盒用于鉴定核酸分子中的核苷酸突变。
6.一种用于检测新型冠状病毒E484位点变异的试剂盒,包括特异性探针;所述特异性
探针是基于新型冠状病毒E484位点变异设计的,其中具有对应于新型冠状病毒E484位点变
异的核苷酸G,将其命名为目标G;所述特异性探针标记有荧光染料
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