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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 113151604 A
(43)申请公布日 2021.07.23
(21)申请号 202110476316.8 C12N 15/11 (2006.01)
C12R 1/93 (2006.01)
(22)申请日 2021.04.29
(71)申请人 兰州大学
地址 730000 甘肃省兰州市城关区天水南
路222号
申请人 兰州大学淮安高新技术研究院
(72)发明人 刘相 茆晨鑫 于桂琴 汪硕硕
刘丽君 魏晓辉 武文君 姜瑞婷
(74)专利代理机构 南京常青藤知识产权代理有
限公司 32286
代理人 金迪
(51)Int.Cl.
C12Q 1/70 (2006.01)
C12Q 1/6806 (2018.01)
C12Q 1/6816 (2018.01)
权利要求书2页 说明书4页 附图2页
(54)发明名称
一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构及合
成方法
(57)摘要
本发明提供一种检测新型冠状病毒的PNA探
针结构及合成方法,具体涉及到病毒技术领域。
本发明包括如下步骤:合成肽核酸单体‑树脂;合
成寡聚体‑树脂;5’端头荧光团的键合。本发明提
出的一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构及合
成方法,能够提高新型冠状病毒的检测速度、灵
敏度和准确度。
A
4
0
6
1
5
1
3
1
1
N
C
CN 113151604 A 权 利 要 求 书 1/2页
1.一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构,其特征在于:以肽核酸(即PNA)为骨架模拟
和取代常规DNA或RNA中磷酸戊糖酯骨架,即探针骨架为PNA骨架;PNA侧链上用以杂交识别
的碱基序列的正确顺序,即为下列顺序:5‑FAM‑CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG‑BHQ1‑3
或者5‘‑FAM‑TTGCTGCTGCTTGACAGATT‑TAMRA‑3’。
2.根据权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构的合成方法,其特征在
于,制备0.1mmol PNA的方法包括如下步骤:
S1:将0.1g树脂与适量DMF加入柱反应器中,振摇溶胀30min后抽干,DMF洗6次,每次振
摇3min,抽干;将Fmoc‑肽核酸单体0.5mmol、DCC0.5mmol、HOSU 0.5mmol、DMAP 0.1mmol用适
量DMF溶解,半小时后转移至固相反应器,加入适量DMF避光振摇反应3h,反应结束后抽干,
用DMF、DCM、MeOH分别洗3次,每次振摇3min,抽干;
S2:向S1制备的溶液中加入脱保护试剂20%(V/V)哌啶/DMF溶液,振摇30min脱下树脂
上的首个PNA单体的保护基Fmoc,抽干,DMF洗6次,每次振摇3min,抽干;将从碱基序列3’→
5’第二个Fmoc‑PNA单体0.3mmol、DCC 0.3mmol、HOSU 0.3mmol、DMAP 0.1mmol用适量DMF溶
解,半小时后转移至装有肽核酸‑树脂的固相反应器,加入适量DMF避光振摇反应3h;反应结
束后抽干,用DMF、DCM、MeOH分别洗3次,每次振摇3min,抽干;重复S2中的上述步骤,脱去N‑
末端的Fmoc保护基,进入连接下一个肽核酸单体循环,不断两两缩合,直至合成预期得到的
寡聚体;最后一次缩合完成后,得到的寡聚体‑树脂以甲醇洗5次,每次振摇2min,抽干,抽真
空干燥过夜,称重;
S3:称取
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