一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构及合成方法发明专利.pdfVIP

一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构及合成方法发明专利.pdf

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(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 113151604 A (43)申请公布日 2021.07.23 (21)申请号 202110476316.8 C12N 15/11 (2006.01) C12R 1/93 (2006.01) (22)申请日 2021.04.29 (71)申请人 兰州大学 地址 730000 甘肃省兰州市城关区天水南 路222号 申请人 兰州大学淮安高新技术研究院 (72)发明人 刘相 茆晨鑫 于桂琴 汪硕硕  刘丽君 魏晓辉 武文君 姜瑞婷  (74)专利代理机构 南京常青藤知识产权代理有 限公司 32286 代理人 金迪 (51)Int.Cl. C12Q 1/70 (2006.01) C12Q 1/6806 (2018.01) C12Q 1/6816 (2018.01) 权利要求书2页 说明书4页 附图2页 (54)发明名称 一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构及合 成方法 (57)摘要 本发明提供一种检测新型冠状病毒的PNA探 针结构及合成方法,具体涉及到病毒技术领域。 本发明包括如下步骤:合成肽核酸单体‑树脂;合 成寡聚体‑树脂;5’端头荧光团的键合。本发明提 出的一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构及合 成方法,能够提高新型冠状病毒的检测速度、灵 敏度和准确度。 A 4 0 6 1 5 1 3 1 1 N C CN 113151604 A 权 利 要 求 书 1/2页 1.一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构,其特征在于:以肽核酸(即PNA)为骨架模拟 和取代常规DNA或RNA中磷酸戊糖酯骨架,即探针骨架为PNA骨架;PNA侧链上用以杂交识别 的碱基序列的正确顺序,即为下列顺序:5‑FAM‑CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG‑BHQ1‑3 或者5‘‑FAM‑TTGCTGCTGCTTGACAGATT‑TAMRA‑3’。 2.根据权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构的合成方法,其特征在 于,制备0.1mmol PNA的方法包括如下步骤: S1:将0.1g树脂与适量DMF加入柱反应器中,振摇溶胀30min后抽干,DMF洗6次,每次振 摇3min,抽干;将Fmoc‑肽核酸单体0.5mmol、DCC0.5mmol、HOSU 0.5mmol、DMAP 0.1mmol用适 量DMF溶解,半小时后转移至固相反应器,加入适量DMF避光振摇反应3h,反应结束后抽干, 用DMF、DCM、MeOH分别洗3次,每次振摇3min,抽干; S2:向S1制备的溶液中加入脱保护试剂20%(V/V)哌啶/DMF溶液,振摇30min脱下树脂 上的首个PNA单体的保护基Fmoc,抽干,DMF洗6次,每次振摇3min,抽干;将从碱基序列3’→ 5’第二个Fmoc‑PNA单体0.3mmol、DCC 0.3mmol、HOSU 0.3mmol、DMAP 0.1mmol用适量DMF溶 解,半小时后转移至装有肽核酸‑树脂的固相反应器,加入适量DMF避光振摇反应3h;反应结 束后抽干,用DMF、DCM、MeOH分别洗3次,每次振摇3min,抽干;重复S2中的上述步骤,脱去N‑ 末端的Fmoc保护基,进入连接下一个肽核酸单体循环,不断两两缩合,直至合成预期得到的 寡聚体;最后一次缩合完成后,得到的寡聚体‑树脂以甲醇洗5次,每次振摇2min,抽干,抽真 空干燥过夜,称重; S3:称取

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