一种检测新型冠状病毒的引物探针组合及其应用发明专利.pdfVIP

一种检测新型冠状病毒的引物探针组合及其应用 技术领域 本发明属于分子生物学检测技术领域，尤其涉及一种检测新型冠状病毒的引 物探针组合及其应用。 背景技术 2019 新型冠状病毒 （2019-nCoV/SARS-CoV-2 ）是引发新型冠状病毒肺炎 （COVID-19）的病原体，其具有潜伏期长、传染性强的特点，危害人们的身体健 康，影响了社会的发展，造成了巨大的损失。 目前，针对新型冠状病毒的检测方法主要包括测序法、qPCR 法及胶体金法。 测序检测需要配合测序专用的仪器进行使用，适用性较差，且对操作人员的技术 水平要求较高。qPCR 法是目前应用最广的检测方法，但受样本采集部位、采集 方式、采集量、运输与储存及检测人员的操作水平等因素的影响，可能存在一定 的误差，仍有可以改进的空间。胶体金法属于抗体检测，检测患者的血清中是否 含有特异性抗体，特异性高，准确性好，但患者从感染病毒到体内生成抗体需要 的时间较长，通常只能检测出感染时间较长的患者，对处于潜伏期患者的检测效 果不佳，且不利于患者的管控。 CN111879939A 公开了一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒，所述试剂盒包 括卡盒、IgM 检测试纸条和稀释液；所述IgM 检测试纸条包括顺次搭接在PVC 板上的样品垫、IgM 检测结合垫、层析膜和吸水纸；所述IgM 检测结合垫包被有 胶体金颗粒标记羊抗人IgM 单克隆抗体和胶体金颗粒标记新型冠状病毒重组蛋 白；所述层析膜包被有鼠抗人μ链单克隆抗体和羊抗鼠IgG 多克隆抗体。该试剂 盒使用方便，检测准确率高，特异性好，但同样存在只能检测出感染时间较长的 患者的弊端。 针对新型冠状病毒的检测，目前普遍存在对感染初期患者的检测灵敏度低、 准确性差的问题。因此，如何提供一种新型冠状病毒的检测方法，可以提高检测 反应的灵敏度与精准度，并可以对感染初期的病人进行及时的诊断与治疗，已成 为亟待解决的问题。 发明内容 针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种检测新型冠状病毒的引物 探针组合及其应用，所述引物探针组合具有良好的灵敏度，最低检测限度可达 1×10 3copies/mL，特异性好，检测结果准确，具有极高的应用价值。 为达此目的，本发明采用如下技术方案： 第一方面，本发明提供了一种检测新型冠状病毒的引物探针组合，所述检测 新型冠状病毒的引物探针组合包括特异性扩增并检测2019-nCoV 的ORF1ab 基 因、核壳蛋白N 基因和刺突蛋白S 基因N501Y 突变位点的特异性引物对和探针； 扩增所述ORF1ab 基因的特异性引物对包括SEQ ID No.1~2 所示的核苷酸序 列，检测所述ORF1ab 基因的探针包括SEQ ID No.3 所示的核苷酸序列； 扩增所述核壳蛋白N 基因的特异性引物对包括SEQ ID No.4~5 所示的核苷酸 序列，检测所述核壳蛋白N 基因的探针包括SEQ ID No.6 所示的核苷酸序列； 扩增所述刺突蛋白S 基因N501Y 突变位点的特异性引物对包括SEQ ID No.7~8 所示的核苷酸序列，检测所述刺突蛋白S 基因N501Y 突变位点的探针包括SEQ ID No.9 所示的核苷酸序列。 SEQ ID No.1：ACCGCAAGGTTCTTCTTCGT； SEQ ID No.2：CAAGCTCGTCGCCTAAGTCA； SEQ ID No.3：CTGGTGGCCATAGTTACGGCGCCG； SEQ ID No.4：TGGACCCCAAAATCAGCGAA； SEQ ID No.5：CCCACTGCGTTCTCCATTCT； SEQ ID No.6：GCACCCCGCATTACGTTTGGTGGACCC； SEQ ID No.7：AGGTTTTAATTGTTACTTTCCT； SEQ ID No.8：GCATGTAGAAGTTCAAAAGAAAG； SEQ ID No.9：CCCACTTATGGTGTTGG。 本发明中，基于多重qPCR 技术，可以对ORF1ab 基因、N 基因和S 基因进行 同步检测，并且可以对新型冠状病毒的S 基因N501Y 位点的突变情况进行检测， 对病毒的突变株与原始株进行有效鉴别，从而采取更加有效的预防及治疗措施， 灵敏度高，重复性好，准确性高，具有广阔的应用前景。 优选地，所述检测新型冠状病毒的引物探针组合还包括特异性扩增并检测内 标基因RNaseP 的特异