一种人呼吸道病毒核酸多重检测引物、探针及试剂盒发明专利.pdfVIP

一种人呼吸道病毒核酸多重检测引物、探针及试剂盒 技术领域 本发明涉及生物检测技术领域，具体来说，涉及一种多重实时荧光PCR 法检 测人呼吸道病毒的引物、探针及试剂盒。 背景技术 呼吸道病原体感染人鼻腔、咽喉、气管和支气管等系统易引起炎症造成呼吸 道感染(respiratory tract infection，RTI)。呼吸道感染可由多种病原体引起，包括 病毒、细菌、支原体、衣原体和霉菌等，其中约80％是由病毒感染引起，最常 见的包括流感病毒(influenza virus，Flu)、副流感病毒(human parainfluenza Virus， PIV)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)、腺病毒(adenovirus，ADV) 等。呼吸道感染是导致全球范围内所有年龄人群门诊就诊和住院的主要原因，且 是5 岁以下儿童死亡的第二大原因。 流感病毒可以分为甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒及丁型流感 病毒4 类。(1)甲型流感病毒是引起流行性感冒大流行的最主要病原体。甲型流 感病毒表面蛋白HA 有16 个亚型，NA 有9 个亚型，病毒可根据HA 和NA 的组 合情况进一步分类为若干亚型。由于HA 和NA 抗原结构能通过基因位点的突变 或基因重组使病毒变异，因此甲型流感病毒属中的禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)能够突破种属屏障感染人类，目前能够感染人类的AIV 有：H5N1、H5N6、 H6N1、H7N7、H7N9 等亚型。AIV 曾暴发式大流行，涉及多个国家和地区。(2) 乙型流感病毒。该病毒多在小范围内流行传播，目前无亚型之分，引起人类感染 的主要是乙型Yamagata 系或乙型Victoria 系。亚太地区的15 个国家在每个月的 流行性感冒确诊病例中，乙型流感病毒的确诊率为0～92％，与甲型流感病毒不 同，儿童、老年人等特定人群易感乙型流感病毒，并易引发并发症，对社会造成 的负担甚至超过甲型流感病毒。(3)丙型流感病毒。该病毒检出率较低，通常导 致轻度感染，对公共卫生和健康影响较小。(4)丁型流感病毒。该病毒是最近几 年才被发现的，主要感染牛、羊、猪等。 冠状病毒于1937 年首次从禽类分离，是一种具有包膜的单股正链RNA 病毒， 直径约80～200nm，包膜上有棘突，是已知最大的RNA 病毒。冠状病毒分为α、 β、γ、δ4 组，其中β冠状病毒又分A、B、C、D 4 个亚组。目前发现能感染人的 冠状病毒主要为α、β两大组。 由于不同呼吸道病原体感染导致的临床表现相似，仅从临床表现还不足够区 分感染病原体，因此灵敏、快速和准确的检测呼吸道病原体对其感染的诊断和治 疗十分重要。多重实时荧光定量PCR(multiplex real time PCR，mRT-qPCR)通过在 反应体系加入荧光染料或荧光标记的特异性探针，能够实现闭管实时反应，避免 交叉污染，一个反应体系可同时检测多个感染病原体，已广泛应用于呼吸道病原 体的检测。mRT-qPCR 因其高特异性、高灵敏性、快速等优点具有很好的临床诊 断应用价值，因此成为疾病预防控制系统和临床检验系统病原检测的重要手段及 标准之一。 发明内容 针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种人呼吸道病毒核酸多重检 测引物、探针及试剂盒，能够克服现有技术的上述不足。 为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的： 一种人呼吸道病毒核酸多重检测引物及探针，包括针对COVID-19ORF1ab、 COVID-19N、H1N1、FluA、FluB 和RNase P 基因的特异性引物及探针； COVID-19ORF 1ab 基因的正向引物、反向引物和探针序列分别为： ORF 1ab-F：5-CCCTGTGGGTTTTACACTTAA，如SEQ ID NO.1 所示， ORF 1ab-R：5-TGCATCAGCTGACTGAAGCAT，如SEQ ID NO.2 所示， ORF 1ab-P：5-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-3 -BHQ1，如SEQ ID NO.3 所示； COVID-19N 基因的正向引物、反向引物和探针序列分别为： N-F：5-GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT-3，如SEQ ID NO.4 所示， N-R：5-CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG-3，如SEQ ID NO.5 所示，