一种新型冠状病毒的全基因组扩增引物、试剂盒及一步法富集及建库方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112981009 A (43)申请公布日 2021.06.18 (21)申请号 202110465534.1 C12Q 1/686 (2018.01) C12Q 1/6806 (2018.01) (22)申请日 2021.04.28 C12N 15/11 (2006.01) (71)申请人 湖北省疾病预防控制中心（湖北省 C40B 50/06 (2006.01) 预防医学科学院） C12R 1/93 (2006.01) 地址 430079 湖北省武汉市洪山区卓刀泉 北路35号 申请人 上海伯杰医疗科技有限公司 (72)发明人 方斌　刘琳琳　张春雷　赵百慧　 余晓　叶国军　李翔　雷亚克　 韩诗　沈林　 (74)专利代理机构 上海硕力知识产权代理事务 所(普通合伙) 31251 代理人 郭桂峰 (51)Int.Cl. C12Q 1/70 (2006.01) 权利要求书2页 说明书12页 附图4页 (54)发明名称 一种新型冠状病毒的全基因组扩增引物、试 剂盒及一步法富集及建库方法 (57)摘要 本发明提供了一种新型冠状病毒的全基因 组的扩增引物、试剂盒及一步富集及建库方法， 本发明通过设计75对引物，实现一步法完成新型 冠状病毒全基因组的富集，避免转管或过多的操 作步骤引起的污染，测序后的数据可以覆盖新型 冠状病毒10000倍以上。本发明通过引物及其引 物的配比，可以提升测序数据均一性，以便于降 低测序成本和提高富集成功率。本发明通过对第 一次PCR程序的优化，将富集扩增中的循环数降 低，减少了非特异性扩增，提高测序数据利用率。 A 9 0 0 1 8 9 2 1 1 N C CN 112981009 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种用于新冠病毒的检测引物组合，其特征在于：所述引物组合包括由表1 SEQ  ID  NO.1‑150所示的75对引物序列组成，其中37对偶数对的引物组成第一引物组，38对奇数对 引物组成第二引物组。 2.根据权利要求1所述的一种用于新冠病毒的检测引物组合，其特征在于：每对所述引 物的扩增长度分布在500‑548bp，且每对相邻的引物扩增产物重叠区域的范围为75‑147bp。 3.根据权利要求2所述的检测引物组合在制备检测新型冠状病毒中的应用，其特征在 于：所述引物组合中的各引物体积配比如表1所示。 4.权利要求3所述的检测引物组合在制备检测新型冠状病毒的产品中的应用。 5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂或试剂盒。 6.一种新型冠状病毒全基因组的一步富集方法，其特征在于，包括如下步骤： 采集待测样本，提取待测样本中的病毒核酸后，将提取的核酸等量置于两个离心管中， 并通过病毒核酸逆转录和全基因组富集的试剂配方，以及采用第一次PCR程序对两个离心 管中的核酸依次进行逆转录、变性、扩增富集、延伸后得到富集产物，其中，第一次PCR程序 中两个离心管中试剂配方分别包括权利要求3‑5任一应用中