一种冠状病毒SARS-CoV-2及其突变毒株的检测试剂盒与其应用发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 113215313 A (43)申请公布日 2021.08.06 (21)申请号 202110464403.1 (22)申请日 2021.04.28 (71)申请人 山东莱博生物科技有限公司 地址 250100 山东省济南市高新区新泺大 街1666号三庆齐盛广场5号楼6层 (72)发明人 陈振　欧兰香　朱成龙　寇宗阳　 王岩　贾秀玲　苏真真　高丽鹤　 (74)专利代理机构 济南金迪知识产权代理有限 公司 37219 代理人 陈桂玲 (51)Int.Cl. C12Q 1/70 (2006.01) C12Q 1/6858 (2018.01) C12N 15/11 (2006.01) 权利要求书3页 说明书10页 附图3页 (54)发明名称 一种冠状病毒SARS-CoV-2及其突变毒株的 检测试剂盒与其应用 (57)摘要 本发明公开了一种冠状病毒SARS‑CoV‑2及 其突变毒株的检测试剂盒，包括数字PCR反应液、 数字PCR引物混合液和阴性对照溶液，并结合全 自动微滴芯片数字PCR系统完成对冠状病毒 SARS‑CoV‑2及其突变毒株的检测。本发明是针对 冠状病毒SARS‑CoV‑2非突变株ORF1ab基因、N基 因2个靶基因和其突变毒株S基因中E484K、 L452R、D614G位点共3个突变位点设计特异性引 物探针，通过多基因不同位点数字PCR检测提高 试剂盒检测准确性，并实现快速判定。本发明试 剂盒在新型冠状病毒检测、筛查及疫苗开发时更 A 符合临床需求，也使检测更快捷和应用更广泛。 3 1 3 5 1 2 3 1 1 N C CN 113215313 A 权　利　要　求　书 1/3页 1.一种冠状病毒SARS‑CoV‑2及其突变毒株的检测试剂盒，该试剂盒为数字PCR多重突 变检测试剂盒，其包括数字PCR反应液、数字PCR引物混合液和阴性对照溶液，并结合全自动 微滴芯片数字PCR系统完成对冠状病毒SARS‑CoV‑2及其突变毒株的检测；其中所述数字PCR 引物混合液是用于检测冠状病毒SARS‑CoV‑2非突变株ORF1ab基因、N基因、突变毒株S基因 中E484K、L452R、D614G位点的正向引物、反向引物和引物探针的混合液，所述引物探针上设 有至少一个荧光基团； 其特征在于： 所述数字PCR反应液的组分是250mM的PCR缓冲液，其为pH8.0、Tris‑Hcl缓冲液，20mM的 2+ 液，4种dNTPs各1mM，5U的c‑MMLV酶，10U的热启动Taq酶，40U的RNasin； Mg 溶 所述检测冠状病毒SARS‑CoV‑2非突变株ORF1ab基因用的正向引物、反向引物和引物探 针分别为ORF1ab‑F、ORF1ab‑R和ORF1ab‑P；其中所述正向引物ORF1ab‑F的核苷酸序列为5’‑ GAGATGCCACAACTGCTT‑3’，所述反向引物ORF1ab‑R的核苷酸序列为5’‑ GCTATTCATACAGGCGTT‑3’，所述引物探针ORF1ab‑P的核苷酸序列为5’‑VIC‑ AGTGTTTTTAACATTTGTCA‑BHQ1‑3’，其中，VIC为荧光基团，BHQ1为淬灭基团； 所述检测冠状病毒SARS‑CoV‑2非突变株N基因用的正向引物、反向引物和引物探针分 别为N‑F、N‑R、N‑P；其中所述正向引物N‑F的核苷酸序列为5’‑TGGACTTCCCTATGGTGC‑3’，所 述反向引物N‑R的核苷酸序列为5’‑AGCACGATGTTGAAGGAGT‑3’，所述引物探针N‑P的核苷酸 序列为5’‑