一种冠状病毒SARS-CoV-2数字PCR多重检测试剂盒及其应用发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 113215312 A (43)申请公布日 2021.08.06 (21)申请号 202110464355.6 (22)申请日 2021.04.28 (71)申请人 山东莱博生物科技有限公司 地址 250100 山东省济南市高新区新泺大 街1666号三庆齐盛广场5号楼6层 (72)发明人 李登旺　陈振　欧兰香　蔡克海　 张绍明　吴冰　朱成龙　丁兴龙　 李文靖　 (74)专利代理机构 济南金迪知识产权代理有限 公司 37219 代理人 陈桂玲 (51)Int.Cl. C12Q 1/70 (2006.01) C12Q 1/6858 (2018.01) C12N 15/11 (2006.01) 权利要求书3页 说明书12页 附图4页 (54)发明名称 一种冠状病毒SARS-CoV-2数字PCR多重检测 试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种冠状病毒SARS‑CoV‑2数 字PCR多重检测试剂盒，包括数字PCR反应液、数 字PCR引物混合液和阴性对照溶液，并结合全自 动微滴芯片数字PCR系统完成对冠状病毒SARS‑ CoV‑2的检测。本发明是针对冠状病毒SARS‑CoV‑ 2非突变株ORF1ab基因、N基因、E基因3个靶基因 和其突变毒株B.1.1.7S基因中N501Y、HV69‑ 70del位点及南非突变毒株B.1.351S基因中 E484K、K417N位点即两种突变株的4个突变位点 设计特异性引物探针，通过多基因不同位点检测 提高检测准确性，数字PCR利用泊松分布计算出 A 目标拷贝数，实现单分子检测，能够快速实现准 2 确判定。本发明产品使得新型冠状病毒数字PCR 1 3 5 检测技术更符合临床需求、应用更广泛。 1 2 3 1 1 N C CN 113215312 A 权　利　要　求　书 1/3页 1.一种冠状病毒SARS‑CoV‑2数字PCR多重检测试剂盒，该试剂盒包括数字PCR反应液、 数字PCR引物混合液和阴性对照溶液，并结合全自动微滴芯片数字PCR系统完成对冠状病毒 SARS‑CoV‑2的检测；其中所述数字PCR引物混合液是用于检测冠状病毒SARS‑CoV‑2非突变 株ORF1ab基因、N基因、E基因、突变毒株B.1.1.7S基因中N501Y、HV69‑70del位点及南非突变 毒株B.1.351S基因中E484K、K417N位点的正向引物、反向引物和引物探针的混合液，所述引 物探针上设有至少一个荧光基团； 其特征在于： 所述数字PCR反应液的组分是250mM的PCR缓冲液，其为pH8.0、Tris‑Hcl缓冲液，20mM的 2+ 液，4种dNTPs各1mM，5U的c‑MMLV酶，10U的热启动Taq酶，40U的RNasin； Mg 溶 所述检测冠状病毒SARS‑CoV‑2非突变株ORF1ab基因用的正向引物、反向引物和引物探 针分别为ORF1ab‑F、ORF1ab‑R和ORF1ab‑P；其中所述正向引物ORF1ab‑F的核苷酸序列为5’‑ GAGATGCCACAACTGCTT‑3’，所述反向引物ORF1ab‑R的核苷酸序列为5’‑ GCTATTCATACAGGCGTT‑3’，所述引物探针ORF1ab‑P的核苷酸序列为5’‑CY5‑ AGTGTTTTTAACATTTGTCA‑BHQ3‑3’，其中，CY5为荧光基团，BHQ3为淬灭基团； 所述检测冠状病毒SARS‑CoV‑2非突变株N基因用的正向引物、反向引物和引物探针分 别为N‑F、N‑R、N‑P；其中所述